[发明专利]亚克隆细胞株TF-1-A2及其制备方法与用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是一株用于定量检测神经生长因子生物学活性的TF-1亚克隆稳定细胞株TF-1-A2，其制备方法以及其在NGF制品生物学活性的测定上的用途。

背景技术

随着基因工程技术的发展，大量的基因工程药物不断进入临床和生产。由于基因工程药物不同于一般的化学药品，它大多是多肽和蛋白质类物质，来源于活的生物体，具有复杂的分子结构，在生产过程中容易受到各种理化条件等的影响，因此，对于此类产品要从各个方面进行全面的、严格的质量控制。对于细胞因子类生物制品来说，由于其化学本质为多肽或蛋白质，其活性由产品的氨基酸序列、氨基酸序列的翻译后修饰及其空间结构决定，其活性效价和其绝对质量不一致，所以也就不能按化学药品那样直接用重量单位来决定。此类产品的生物学活性与药效学基本一致，是药效学的直观反映，利用这类制品的特定生物学活性建立特定的测定效价体系，定出其效价单位，是保证产品药效的重要手段和质量控制的重要组成部分和关键指标(王军志主编，生物技术药物研究开发和质量控制(第二版)，北京：科学出版社，2007)。

由于细胞因子类生物制品的生物学活性的降低或丧失，通常并不表现为物理化学性质的改变，无法使用常规检测方法来测定，目前最常用的方法是利用分离的器官和组织、原代细胞或传代细胞系的体外测定法。而基于连续生长、因子依赖的、克隆化的细胞系的体外细胞培养测定法，由于具有测定结果精确、可以定量、重现性好、经济、容易使用和便于统计分析的优点得到广泛的应用(Kitamura T，Tange T，Terasawa T et al.Establishment and characterisation of a unique human cell line which proliferates dependently on GM-CSF，IL3 and erythropoietin.J.Cell.Physiol.1989；140：323-334.；贾茜，周兴军，王辉，等.MTT法测定三种基因工程细胞因子生物学活性方法研究.中国生化药物杂志.2000，21(1)：8-11.；沈世烨.TF-1细胞饥饿在IL-4生物学活性测定中的应用.海峡药学.2006，18(5)：69-70.；袁力勇，饶春明，李响，等.GM-CSF/IL-3融合蛋白质量标准的研究和建立.药物分析杂志.2008，28(10)：1605-1608.)。目前利用体外细胞培养法进行活性测定的产品有：G-CSF(NFS-60细胞)、GM-CSF(TF-1细胞)、EGF(3T3细胞)、IL-2(CTLL-2细胞)、IL-3和GM-CSF/IL-3融合蛋白(Mo7E，TF-1细胞)、IL-6(7TD1，B9-11细胞)和IL-11(T-10细胞)等(国家药典委员会编.中华人民共和国药典.2010年版，三部.附录X：D，E，F，G，H；王军志主编.生物技术药物研究开发和质量控制.第二版，北京：科学出版社，2007)。