[发明专利]一种鉴别鸭瘟病毒强毒与疫苗毒的PCR检测方法无效
申请号: | 201210116719.2 | 申请日: | 2012-04-20 |
公开(公告)号: | CN102643932A | 公开(公告)日: | 2012-08-22 |
发明(设计)人: | 程安春;尹雪琴;汪铭书;陈孝跃 | 申请(专利权)人: | 四川农业大学 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 611130 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鉴别 瘟病 毒强毒 疫苗 pcr 检测 方法 | ||
1.一种鉴别鸭瘟病毒强毒与疫苗毒的PCR检测方法,其特征是:具体步骤为:
a设计扩增鸭瘟病毒UL2基因的特异性引物,引物序列为:上游引物P1:5’-ACGAGGGAGACCCAAATGAC-3’,下游引物P2:5’-TTTATACTGTTCCACAAGGAAGTTG-3’;
b按常规方法提取样品中的核酸;
c.PCR检测,同时设立阴性对照;PCR检测体系具体为:2×傻瓜PCR Mixtrue 12.5μL,P1(20pmol/μL)1ul,P2(20pmol/μL)1ul,模板溶液1μL,最后用超纯水补至25μL;PCR检测体系扩增参数具体为:95℃预变性5min,95℃变性1min,58.3℃退火1min,72℃延伸1min,循环40次,最后72℃延伸10min;
d琼脂糖凝胶上电泳,紫外灯照射观察扩增片段的长度,若PCR扩增条带为1018bp,则待测样品含有鸭瘟病毒强毒,若PCR扩增条带为490bp,则待测样品含有鸭瘟病毒弱毒。
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