[发明专利]春石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.一种春石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法，以春石斛兰八分熟的蒴果种子为外植体，采用培养基诱导生成原球茎从而进行离体快速繁殖，具体包括以下步骤：

1)外植体的准备和消毒：将春石斛兰人工授粉后进行套袋，90～110天后待其八分成熟，摘取其蒴果，在超净工作台上，用75％(体积比)酒精消毒30～60s后，再用15～20％(体积比)次氯酸钠溶液浸泡、无菌水冲洗；

2)原球茎的诱导培养：用无菌吸水纸吸干消毒后的春石斛兰蒴果表面水分，用解剖刀切开蒴果，挑取石斛兰种子，接种于诱导培养基上进行暗培养，20～30d后转移至光照下培养，继续培养40-50d后逐渐萌发成圆锥状的原球茎；

3)原球茎的增殖与分化：将原球茎转接于增殖与分化培养基中，萌发、分化成大量不定芽；

4)壮苗与生根培养：将不定芽切成单芽，接种于壮苗与生根培养基中，培养得生根试管苗；

5)试管苗的移栽：将生根试管苗带瓶盖置于常温条件下炼苗5～7d，打开瓶盖再炼苗2～3d，将生根试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去基部残留的培养基，移栽于以苔藓为基质的穴盘，浇水后保持温度25±2℃，空气湿度70～80％。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的春石斛兰八分熟的蒴果种子，其个体大小接近成熟的春石斛蒴果，颜色为青绿色，种壳不硬、不裂开。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的诱导培养基配方为：MS+BA 0.2～2.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L+水解酪蛋白0.5～1.5g/L+香蕉泥20～80g/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5～6.5g/L，pH＝5.4～5.6。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的暗培养温度为24～26℃，黑暗，无光照。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，光照培养温度为24～26℃，光照强度为1500～2500勒克斯。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的增殖与分化培养基配方为：MS+6-BA 0.5～1.0mg/L+KT 0.2～0.5mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L+水解酪蛋白0.5～1.5g/L+香蕉泥20～80g/L+蔗糖30～40g/L+琼脂粉5.5～6.5g/L，pH＝5.4～5.6。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的壮苗与生根培养基培养为：1/2MS+6-BA 0.1～0.2mg/L+IBA 0.5～1.5mg/L+香蕉泥20～30g/L+蔗糖20～30g/L，pH＝5.4～5.6。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)、步骤4)是在光照下培养。