[发明专利]文蛤微卫星标记的检测方法有效
| 申请号： | 201210112746.2 | 申请日： | 2012-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN102851357A | 公开（公告）日： | 2013-01-02 |
| 发明（设计）人： | 刘保忠;卢霞;王鸿霞 | 申请（专利权）人： | 中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 周秀梅;李颖 |
| 地址： | 266071*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 文蛤 卫星 标记 检测 方法 | ||
1.文蛤微卫星标记的检测方法，其特征在于：首先利用文蛤EST序列获取微卫星标记的微卫星核心序列，并在其序列两端设计特异性引物并进行PCR扩增，对PCR产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，从而检测文蛤个体的基因型，及在此微卫星位点的遗传变异，获得文蛤该位点的遗传多态性图谱；
所述特异性引物为正链：5’-TCCCAGGAACGATTGTTAGG-3’，负链：5’-AGCATTCACGACACCAACAT-3’。
2.按权利要求1所述的文蛤微卫星标记的检测方法，其特征在于：所述使用微卫星核心序列两端设计的特异性引物序列时的退火温度为58℃。
3.按权利要求1所述的文蛤微卫星标记的检测方法，其特征在于：所述PCR扩增参数为：100ng待测不同地理群体或群体内文蛤个体的基因组DNA，10×PCR Buffer，2.5μL；Mg2+，1.5mmol/L；rTaq(5U/μL)，0.2μL；dNTP(10mmol/L)，0.5μL；上述正反向引物(10μmol/L)，各0.5μL；加双蒸水补体系到25μL。
4.按权利要求1或3所述的文蛤微卫星标记的检测方法，其特征在于：所述PCR扩增为：94℃预变性5min，30个循环，72℃延伸10min，4℃保存。
5.按权利要求4所述的文蛤微卫星标记的检测方法，其特征在于：所述PCR扩增为：94℃变性40s，58℃退火40s，72℃延伸50s。
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