[发明专利]一种基于表面等离子共振技术的食品中农兽药残留检测方法

权利要求书

1.一种应用表面等离子体共振仪的食品中农兽药残留检测方法，利用同一传感芯片对不同农兽药残留组分的含量进行检测；其特征在于包括以下步骤：

（一）传感芯片表面适配体固定：选择链霉亲和素SA修饰的传感芯片，通过通入5-50μL浓度为1-50μg/L已标记生物素的溶菌酶适配体，在表面等离子体传感芯片上固定上溶菌酶适配体；

（二）对待测农兽药残留组分进行溶菌酶标记，标记方法根据待测物基团不同，所述标记方法包括EDC/NHS法或戊二醛法；

（三）标准溶液配制：用0.01-0.1mol/L（pH＝7.4）的磷酸盐缓冲液配置农兽药残留组分的标准样品储备液，储备液浓度为0.1ng/mL至1mg/mL，用磷酸盐缓冲液将储备液配制成不同浓度的标准溶液，取不同浓度未标记待测残留组分的标准溶液和溶菌酶标记的待测残留组分充分混合后，竞争结合农兽药残留组分相应的适配体或纳米粒子修饰的适配体，其中溶菌酶标记的农兽药残留组分应不少于加入的适配体量；

（四）建立标准曲线：采用表面等离子共振谱仪测量，以0.02mol/L的磷酸盐缓冲液为测量基准，通过微泵通入5-100μL待测混合样品，记录下表面等离子体共振仪光谱图，通过检测溶菌酶的含量，间接检测农兽药残留组分；取不同浓度待测样品的表面等离子体共振谱图稳定值，绘制工作曲线，并进行多项式曲线拟合，获得回归标准曲线；

（五）定量检测：对于未知含量的农兽药残留组分样品进行检测，同样按照步骤（三）进行；采用表面等离子体共振检测仪记录农兽药残留的光谱图；将光谱图中残留组分的稳定值代入相应的回归曲线方程，计算出食品中农兽药残留组分的浓度值；

（六）通入0.01-0.05mol/L（pH为2-3）的甘氨酸-盐酸缓冲溶液，冲洗传感芯片表面，进行传感元件再生，用于其它农兽药残留检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述标记方法包括选择EDC/NHS法交联羧基与氨基或戊二醛法交联两个氨基。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于采用核酸适配体为识别分子，核酸适配体序列与待测物直接相关。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（一）传感器表面适配体固定，包括如下步骤：

（1）将链霉亲和素SA修饰的传感芯片插入表面等离子体共振检测仪中，在工作通道中进行在线传感表面修饰；

（2）通入0.02mol/L（pH＝7.4）的磷酸盐缓冲液；

（3）通入5-50μL浓度为1-50μg/L生物素修饰的溶菌酶适配体溶液，进行在线偶联至基线稳定；

（4）重复步骤（2）至（3），获得溶菌酶适配体修饰的传感芯片。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于采用溶菌酶标记待测物，与未标记样品一起与核酸适配体发生特异性竞争识别。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（三）中纳米粒子可以是金属纳米粒子或磁性纳米粒子或高分子化合物。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（四）和（五）中通过检测溶菌酶的含量，间接检测农兽药残留组分的浓度值，提高表面等离子体传感芯片的可重复利用性，适用于各种农兽药残留组分的检测。