[发明专利]具有靶向及双重抗肿瘤作用的新型化学重组高密度脂蛋白载药系统及应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种新型的抗肿瘤药物化学重组高密度脂蛋白载体的制备和表征，特别涉及协同药物发挥抗肿瘤作用的重组高密度脂蛋白载体。其特征在于制备新型的重组高密度脂蛋白，并将此作为抗肿瘤药物载体，利用高密度脂蛋白介导胆固醇外流的作用阻断肿瘤细胞增殖所需的营养物质，增强抗肿瘤药物对肿瘤的细胞毒作用，以及利用化学重组的方式提高高密度脂蛋白载体的稳定性。

背景技术

高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)是由载脂蛋白、游离胆固醇、磷脂以及非极性脂质组成的生物活性物质。HDL受体(SR-BI受体)在肝脏、固醇激素生成组织(如前列腺、乳腺、卵巢等)的癌细胞表面高度表达，国内外许多研究者尝试利用重组的HDL(reconstituted HDL，rHDL)来提高药物向肝或肿瘤组织的靶向转运，并取得了良好的成效，例如专利US6514523B1公开了一种载药rHDL的制备方法，用于改善药效、降低毒性和减少网状内皮系统的吞噬，并将药物靶向传输至特定的组织或细胞；CN1307906A公开了一种新型药物载体，利用rHDL载药提高药物向肝或肿瘤组织的靶向转运。HDL具有新生(盘状)和成熟(球状)两种类型，前者主要由载脂蛋白A-I(apolipoprotein AI，apoA-I)包围的磷脂双层膜组成，类似于制剂学上的脂质体结构；后者由非极性的脂质核心及外周的单层磷脂膜和载脂蛋白组成，与固体脂质纳米粒较为接近。专利US5128318公开了一种利用apoA-I和磷脂制备盘状HDL的方法，目的在于移除机体内多余的脂溶性物质，但并未将其应用于载药。由于纳米粒结构的HDL具有独特的亲水-疏水结构、较大的脂质核心(可作为脂溶性药物的贮存空间)、内源性可完全降解以及不被网状内皮系统识别和清除等特性，因此目前研究中，主要选择球状结构的rHDL作为抗肿瘤药物载体。但是，癌细胞对纳米粒结构rHDL中药物的摄取是以同时摄入胆固醇酯为代价，胆固醇酯作为细胞分裂生长的主要营养成分，过多地摄入可能会促进癌细胞的生长，因而降低对肿瘤的治疗效果。相反，脂质体结构rHDL在体内能够模拟新生HDL，介导细胞内胆固醇的流出，从而促进癌细胞的凋亡，产生药效的协同作用。另外，脂质体结构rHDL具有的双层膜结构，具有融合细胞膜的仿生特性，容易使药物进入细胞。此外脂质体结构rHDL与SR-BI受体的亲和力，较纳米粒rHDL大约1个数量级，更易将药物主动传递至靶细胞。因此，作为抗肿瘤药物的载体，脂质体结构rHDL更具优势。

在盘状rHDL代谢过程中，其主要组成成分apoA-I激活血浆中的卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(lecithin-cholesterol acyl transferase，LCAT)，催化rHDL卵磷脂2位的脂酰基转移至胆固醇的3位羟基生成溶血磷脂和胆固醇酯，并且rHDL由最初的脂质体双层膜结构变为纳米粒结构。这种结构的改变容易引起rHDL中包载的药物泄漏，减少药物向靶组织的转运和分布。此外，脂质体结构rHDL的制备方法一般采用胆盐透析法，apoA-I与载体脂质之间通常以疏水力、静电力等产生物理结合。该结合方式容易引起apoA-I凝聚，使得α螺旋结构中带负电荷的氨基酸残基聚集而相互排斥，导致rHDL的物理稳定性降低。

尽管目前以重组HDL作为抗肿瘤药物的载体已见文献和专利报道，但是如何制备体内稳定性较高的重组HDL尚未有报道。

发明内容

本发明通过比较摸索不同的重组方式构建重组盘状HDL载体，发现以化学重组的方式能够显著提高rHDL的物理稳定性和体内稳定性，使其具有更好的向癌细胞传输的特性及逆向转运胆固醇协同治疗癌症的作用。

一种化学重组盘状高密度脂蛋白药系统，主要包含：脂溶性药物、磷脂、胆固醇或修饰的胆固醇、修饰的载脂蛋白AI或者天然的载脂蛋白AI，该载体系统具有类似于脂质体的双层膜结构，所不同的是其缺少脂质体具有的水腔，因此适于脂溶性药物的包载；具有逆向转运胆固醇的功能。