[发明专利]一种小动物肝脏特异性基因转染方法以及以其为基础的转基因小动物模型的构建方法

权利要求书

1.一种构建转基因小动物模型的方法，包括下述步骤：

1)构建携带目的基因的重组表达质粒，所述目的基因为肝脏特异性基因HBV或HCV全基因组基因；

2)以眼底静脉丛注射技术和静脉高压注射转染法为基础的小动物肝脏特异性基因转染方法将所述携带目的基因的重组表达质粒转染到小动物体内，得到转基因小动物模型；

所述以眼底静脉丛注射技术和静脉高压注射转染法为基础的小动物肝脏特异性基因转染方法，是将大于1μg携带目的基因的重组表达质粒溶解于相当于实验动物体重4-10％的生理盐水，以8秒的速度注射入实验动物的眼底静脉丛内，8-36小时后目的基因在实验动物肝脏处获得表达；

所述小动物为新生鼠或树鼩。

2.根据权利要求1所述构建转基因小动物模型的方法，其特征在于：所述携带目的基因的重组表达质粒的注射量为10μg；所述生理盐水的注射量为10％；所述目的基因的表达时间为8-24小时。

3.根据权利要求2所述构建转基因小动物模型的方法，其特征在于：重组质粒为以pCI-neo为出发质粒构建的携带Gluc基因的重组表达质粒，命名为pCI-Gluc，以pGL3为出发质粒构建的携带Fluc基因的重组表达质粒命名为pCMV-Fluc，以pcDNA为出发质粒构建的携带lacZ基因的重组表达质粒命名为pCMV-β-Gal。

4.根据权利要求1至3任一所述构建转基因小动物模型的方法，其特征在于：小动物为新生鼠，目的基因为HBV，包括以下步骤：

1)以pGL3出发载体构建携带HBV1.2倍基因组的重组真核表达质粒，命名为pGL-CP-Fluc-HBV1.2；

2)将所述质粒pGL-CP-Fluc-HBV1.2 10μg溶解于相当于小鼠体重10％的生理盐水中，然后以8秒的速度通过眼底静脉丛快速转染至小鼠体内，得到HBV转基因新生鼠模型。

5.根据权利要求1至3任一所述构建转基因小动物模型的方法，其特征在于：小动物为新生鼠，目的基因为HCV全基因，包括以下步骤：

1)以pCI-neo为出发载体构建携带HCV全基因组的重组真核表达质粒pCI-attB-AerApoEAATP-Fluc-ECMV IRES-HCV；

2)将所述质粒pCI-attB-AerApoEAATP-Fluc-ECMV IRES-HCV 10μg溶解于相当于新生鼠体重10％的生理盐水中，然后以8秒的速度通过眼底静脉丛快速转染至新生鼠体内，得到HCV转基因新生鼠模型。