[发明专利]短柱肖菝葜药材指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及中药材的质量控制方法，具体涉及短柱肖菝葜药材高效液相色谱法指纹图谱的构建方法和标准指纹图谱。

背景技术

短柱肖菝葜(Heterosmilax yunnanensis Gagnep.)为百合科植物的干燥块茎。主要分布于我国的贵州、四川、湖南等地。均收载于四川、贵州、湖南省中药材标准中。民间习称土茯苓或白土苓，与《中国药典》收载的土茯苓不仅药名相近，且历代本草常以土茯苓记载，与土茯苓混用。《湖南植物志》记载白土苓“微苦、淡、涩，平，无毒”。具有清热、除湿、解毒、通利关节的功效，临床用于湿热淋浊，带下，疥癣，杨梅毒疱，筋骨挛痛，瘰疬痈肿及钩端螺旋体等病^[1～3]。

由于短柱肖菝葜因品种、产地、采收期不同而造成质量参差不齐，因而其产品质量的稳定性也难以保证。目前对短柱肖菝葜的鉴定，往往是选取其一、二个活性成分或指标性成分进行含量测定，并以其含量多少来判定质量。例如，刘训红^[4]等用紫外分光光度法鉴别肖菝葜属植物与土茯苓，姜荣兰^[5]等用薄层色谱法对肖菝葜属短柱肖菝葜、华肖菝葜、肖菝葜与菝葜属土茯苓进行比较研究，傅泽民^[6]等对短柱肖菝葜、华肖菝葜和肖菝葜中的总皂苷成分用重量法进行含量测定。秦文杰^[7]等对短柱肖菝葜中总黄酮进行了含量测定并且用高效液相色谱法测定短柱肖菝葜中芒果苷的含量。目前对短柱肖菝葜的化学成研究较薄弱，已知的仅有以下文献报道，张思巨^[8]等对华肖菝葜和短柱肖菝葜的挥发性成分进行了GC-MS分析，从短柱肖菝葜中鉴定了40个化合物，其中多为脂肪酸及其酯类，尚含有醇、醛、酮和烃类，萜类化合物极少，主成分为十六烷酸。秦文杰^[7]从短柱肖菝葜中共分离鉴定了29个化合物。如果用一、二个短柱肖菝葜的活性成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，必须对它的物质群整体予以控制，从整体上有效地表征中药质量。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，对有效控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。本申请人已在贵州建立了该药材的抚育基地。对短柱肖菝葜10批药材进行测定，建立短柱肖菝葜药材指纹图谱测定方法。

发明内容

本发明目的在于建立短柱肖菝葜药材指纹图谱的方法和标准指纹图谱。

为达到本发明目的所采用的技术方案：用高效液相色谱法建立短柱肖菝葜药材指纹图谱的方法，具体包括如下步骤：

①供试品溶液的制备：精密称取短柱肖菝葜药材粉末，加入80％甲醇超声提取，滤过，取续滤液，即得；

②参照物溶液的制备：精密称取丁香酸葡萄糖苷对照品，用甲醇配制成每1ml含丁香酸葡萄糖苷0.1～0.5mg的溶液，作为参照物溶液；

③测定：分别精密吸取供试品溶液及参照物溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图；

其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为磷酸与乙腈组成的梯度洗脱液，检测波长为210～300nm。

优选的，其中，所述供试品溶液的制备，方法如下：称取短柱肖菝葜药材粉末1.0g～5.0g，置于100～500ml具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50～250ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定重量用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，将滤液蒸干，残渣用50％甲醇溶解转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

所述测定，采用精密吸取供试品溶液10～20μl注入高效液相色谱仪，得到色谱图；

色谱条件为，采用色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相为流动相为0.05～0.3％磷酸与乙腈组成的梯度洗脱液，柱温20～40℃；紫外检测：波长210～300nm；流速：0.5～1.2ml/分钟min^-1；时间：90～120分钟。

特别优选的，所述供试品溶液的制备，方法如下：称取短柱肖菝葜药材粉末1.0g，置锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率40KHZ)60分钟，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，将滤液蒸干，残渣用50％甲醇溶解转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

所述色谱条件中流动相为0.05～0.3％磷酸与乙腈组成的梯度洗脱液；柱温25℃；检测波长为254nm；流速为每分钟1.0ml；分析时间90分钟。