[发明专利]短柱肖菝葜药材指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

权利要求书

1.一种短柱肖菝葜药材指纹图谱的建立方法，采用高效液相色谱法，其特征在于包括如下步骤：

①供试品溶液的制备：精密称取短柱肖菝葜药材粉末，加入80％甲醇超声提取，滤过，取续滤液，即得；

②参照物溶液的制备：精密称取丁香酸葡萄糖苷对照品，用甲醇配制成每1ml含丁香酸葡萄糖苷0.1～0.5mg的溶液，作为参照物溶液；

③测定：分别精密吸取供试品溶液及参照物溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图；

其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为磷酸与乙腈组成的梯度洗脱液，检测波长为210～300nm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述供试品溶液的制备，方法如下：称取短柱肖菝葜药材粉末1.0～5.0g，置于100～500ml具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50～250ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定重量用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，将滤液蒸干，残渣用50％甲醇溶解转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

所述测定，采用精密吸取供试品溶液10～20μl注入高效液相色谱仪，得到色谱图；

其中，色谱条件为，采用色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相为0.05～0.3％磷酸与乙腈组成的梯度洗脱液，柱温20～40℃；检测波长为210～300nm；流速：0.5～1.2ml/分钟；时间：90～120分钟。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述供试品溶液的制备，方法如下：称取短柱肖菝葜药材粉末1.0g，置于250ml具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率40KHZ)60分钟，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，将滤液蒸干，残渣用50％甲醇溶解转移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 

所述色谱条件中流动相为0.05～0.3％磷酸与乙腈组成的梯度洗脱液；柱温：25℃；检测波长为254nm；流速为每分钟1.0ml；分析时间90分钟。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：

色谱条件中所述的梯度洗脱为：乙腈(A)-0.1％磷酸(B)梯度洗脱：0min→A∶B＝2∶98；10min→A∶B＝3∶97；90min→A∶B＝35∶65。

5.一种根据权利要求1的方法建立的短柱肖菝葜药材的指纹图谱，其特征在于：色谱图上共有色谱峰11个，其相对保留时间的相对标准偏差均小于1.0％。其中，1号峰平均相对保留时间为0.280，RSD为0.54％，2号峰平均相对保留时间为0.336，RSD为0.22％，3号峰平均相对保留时间为0.898，RSD为0.05％，4号峰平均相对保留时间为0.955，RSD为0.05％，5号峰平均相对保留时间为1.000，6号峰平均相对保留时间为1.728，RSD为0.08％，7号峰平均相对保留时间为2.149，RSD为0.19％，8号峰平均相对保留时间为2.634，RSD为0.13％，9号峰平均相对保留时间为2.678，RSD为0.07％，10号峰平均相对保留时间为2.728，RSD为0.16％，11号峰平均相对保留时间为2.902，RSD为0.13％；其中单峰面积超总面积1％的峰共有11个，它们是1～11号峰；其中单峰面积超总峰面积5％的峰有8个，它们是1号峰、3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、8号峰、10号峰、11号峰；其中单峰面积超总峰面积10％的峰有4个，它们是1号峰、6号峰、10号峰、11号峰。