[发明专利]一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，其涉及一种杂交瘤细胞，具体涉及一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。 

背景技术

Actin即“肌动蛋白”是一种中等大小的蛋白质，外观呈哑铃状，由一个高度保守的基因编码375个氨基酸组成。单体肌动蛋白的相对分子质量为43kDa，有三个结合位点，其中一个是ATP结合位点。肌动蛋白不仅是细胞骨架的主要组成部分，而且还构成了肌细胞中具有收缩功能的组织。肌动蛋白对于细胞活动起到很大的作用，比如细胞的转移和分裂，原生质体的流动，动物胞囊和器官的运动，细胞间信息的传递，以及细胞的形态的建立等(Sellers JR.Fifty years of contractility research post sliding filament hypothesis[J].Journal of muscle research and cell motility，2004，25(6)：475-482；Winograd-Katz SE，Brunner MC，Mirlas N，Geiger B.Analysis of the signaling pathways regulating Src-dependent remodeling of the actin cytoskeleton[J].European journal of cell biology，2011，90(2-3)：143-156.)。Actin不仅存在于细胞质中，而且越来越多的证据表明Actin在细胞核中也具有重要的作用(Primal de Lanerolle，Leonid Serebryannyy.Nuclear actin and myosins：Life without filaments[J].Nature cell biology，2011，13(11)：1282-1288.)。除了线虫类精子细胞，在所有的真核细胞当中均发现有肌动蛋白存在。在生物分子演化过程中，肌动蛋白是被高度保留下来的蛋白质分子之一，从藻类细胞到人体细胞肌动蛋白只有不到20％的变化(Berepiki A，Lichius A，Read ND.Actin organization and dynamics in filamentous fungi[J].Nature review microbiology，2011，9(12)：876-87.)。Actin可以分为6种，β-actin和γ-non-muscle actin 广泛分布于各种组织中，其余4种具有不同肌肉组织特异性。β-actin在肌细胞中占总蛋白的10％，即使在非肌细胞中，肌动蛋白也占细胞总蛋白的1％～5％。β-actin在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白表达水平的变化时常用它来做参照物。 

发明内容

针对现有技术的不足，本发明人经过反复试验，利用原核重组表达技术，表达出的人β-actin蛋白主要以包涵体的形式存在，可溶于8M尿素。电洗脱纯化后的人β-actin蛋白具有很高的纯度，Western blot实验显示该蛋白具有很强的免疫反应性。纯化后的人β-actin蛋白免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术，筛选到10株分泌抗人β-actin蛋白单 克隆抗体的杂交瘤细胞，对其中1株性质优良的杂交瘤细胞进行生物学特性鉴定。本发明杂交瘤细胞的优良特性是现有技术中的杂交瘤细胞不可比拟的，对反应的物种具有广谱性，而对β-actin蛋白具有特异性，即对包括人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白均具有优良的反应特异性。 

本发明所要解决的技术问题是提供一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，其分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验，具有良好的应用价值。 

本发明提供的技术方案是：一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞，其是保藏号为CGMCC 5908的杂交瘤细胞，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。 

该杂交瘤细胞已于2012年3月13日为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC所保藏（保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），其保藏号为CGMCC 5908，经检测存活。该细胞是圆形的半贴壁细胞（用弯管可以将细胞从瓶壁上吹下来，收集细胞不需要胰酶消化，如果有细胞悬浮存在也是正常），细胞分裂倍增的时间是16-18小时。 

同时，本发明还提供所述杂交瘤细胞的制备方法，其步骤如下：