[发明专利]一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及其制备方法

权利要求书

1.一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，其是保藏号为CGMCC 5908的杂交瘤细胞，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

2.一种权利要求1所述的杂交瘤细胞的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

（1）将人β-actin蛋白与弗氏完全佐剂充分乳化，采用皮下免疫方法，以每只50 μg的剂量免疫6只6~8周龄BALB/c小鼠；

（2）两周后进行第2次免疫，将人β-actin蛋白与弗氏不完全佐剂充分乳化，采用与步骤（1）中同样的剂量和方法加强免疫BALB/c小鼠；

（3）2周和4周后分别进行第3次和第4次免疫，免疫剂量与方法同第2次免疫；

（4）融合前3 d用不加佐剂的人β-actin抗原，采用皮下加强免疫，每只剂量为100 μg；

（5）融合前1 d用不加佐剂的人β-actin抗原加强免疫，每只剂量50 μg；

（6）小鼠断尾进行尾尖采血，4 ℃，4000 g离心5 min，取上清，间接ELISA法检测血清效价，选取血清效价大于1,000, 000 的小鼠准备进行细胞融合试验；

（7）选择生长状态良好的SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾脏细胞以1:5~1:10混合，1500 g离心5 min，收集细胞沉淀，弃上清；

（8）轻摇离心管使细胞均匀分散，缓缓加入1 mL 37 ℃预热的PEG 1500并轻轻混匀1.5 min，然后加入20 mL 1640培养基；

（9）800 g离心5 min，收集细胞沉淀，弃上清，细胞中加入含有20%血清的HAT-1640培养基并混匀；

（10）将混匀细胞均匀铺于96孔板中，在37 ℃，CO₂浓度为5%的细胞培养箱中培养5~7 d后观察融合效果并换液；

（11）换液后第4 d用间接ELISA方法检测杂交瘤细胞上清液，选择阳性值高且细胞集落数目少的孔，通过有限稀释法进行亚克隆，每孔细胞数目理论值为1~2个；

（12）经过3~4次亚克隆后，即获得能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。

3.权利要求1所述的杂交瘤细胞在制备抗人β-actin蛋白单克隆抗体的应用。