[发明专利]一种利用SLP将功能蛋白定向固定的方法

权利要求书

1.一种将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)扩增SLP和功能蛋白的编码基因，然后将两种蛋白的编码基因连接入原核表达载体中，得到含有两种蛋白基因的原核表达载体；再将该原核表达载体转化入大肠杆菌表达菌株，加入IPTG诱导大肠杆菌表达菌株表达融合蛋白，然后将菌体破碎并离心，得到SLP与功能蛋白融合的融合蛋白的包涵体沉淀物；

(2)用尿素溶解SLP融合蛋白的包涵体沉淀物，然后用凝胶层析方法纯化，得到可溶性的SLP融合蛋白；

(3)将SLP融合蛋白与含有1～100mM CaCl₂、pH值6～10的Tris溶液混合，得到包埋液，该包埋液中SLP融合蛋白终浓度为0.01～1mg/mL，；

(4)在4～50℃条件下，将介质表面埋于包埋液中孵育2～24小时；

(5)去除包埋液，用HEPES溶液清洗介质表面；

(6)在室温下，将介质表面埋于DMP溶液孵育10～120min；

(7)去除DMP溶液，用Tris缓冲液清洗介质表面；

步骤(1)所述SLP蛋白的氨基酸序列见SEQ ID NO.1；

步骤(1)所述的功能蛋白为蛋白A、链酶亲和素、蛋白G、蛋白A/G或蛋白L中的一种；

所述的蛋白A的氨基酸序列见SEQ ID NO.2，链酶亲和素的氨基酸序列见SEQ ID NO.3，蛋白G的氨基酸序列见SEQ ID NO.4，蛋白A/G的氨基酸序列见SEQ ID NO.5，蛋白L的氨基酸序列见SEQ ID NO.6。

2.根据权利要求1所述的将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于：步骤(1)所述的原核融合表达载体带有T7启动子及抗性筛选标签。

3.根据权利要求1所述的将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于：步骤(1)所述的原核融合表达载体为pET28A。

4.根据权利要求1所述的将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于：

步骤(1)所述的大肠杆菌表达菌株为BL21(DE3)Star；

步骤(1)所述IPTG的浓度为0.1～1mM。

5.根据权利要求1所述的将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于：步骤(1)所述将菌体破碎的方式为超声处理，超声处理的功率为200W，时间10～30min。

6.根据权利要求1所述的将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于：步骤(2)所述尿素的浓度为5M。

7.根据权利要求1所述的将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于：步骤(2)所述的凝胶层析为Superdex 200凝胶过滤层析；所述Superdex200凝胶过滤层析使用5～150mM Tris、50～200mM NaCl pH值9.0缓冲液为流动相，流速2～3mL/min。

8.根据权利要求1所述的将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于：

步骤(5)所述HEPES溶液的浓度为0.01～1M；

步骤(5)所述的介质为超顺磁性磁珠、塑料细胞培养板、超细纤维膜、硅片、玻璃、金属等各种固体表面或两相界面(如气液表面、脂膜表面或脂质体表面)。

9.根据权利要求1所述的将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于：步骤(6)所述DMP溶液的浓度为5～100mM。

10.根据权利要求1所述的将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于：步骤(7)所述Tris缓冲液的浓度为50mM。