[发明专利]一种提高M2型丙酮酸激酶免疫效果的蛋白制备方法无效
| 申请号： | 201210106866.1 | 申请日： | 2012-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN103667321A | 公开（公告）日： | 2014-03-26 |
| 发明（设计）人： | 邹国源;陈琍;高文霞 | 申请（专利权）人： | 上海铂嵋生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N15/70;C12N9/12;C07K7/06;C07K16/40 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200433 上海市邯郸路*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 m2 丙酮酸 激酶 免疫 效果 蛋白 制备 方法 | ||
1.一种提高M2型丙酮酸激酶(PKM2)免疫效果的蛋白的制备方法，其特征在于：
(1)通过GST标签连接PKM2特异序列多肽抗原，提高免疫效果。
(2)多种PKM2的多肽序列，偶联至生物素，减少非特异性抗体结合，提高筛选效率。
(3)9个多肽中独特的氨基酸序列，可以用于筛选不同表位的抗体。
2.如权利要求书1(1)所述，其特征在于将PKM2的独特序列(IY HLQLFEELRR LAPITSDPTE ATAVGAVEASFKCCSGAIIV LTK)连接至带有标签谷胱甘肽巯基转移酶(GST)的pET24a载体上，通过GST标签与PKM2特异序列的连接，增加免疫原的特异性及分子量，提高免疫效果。
3.如权利要求书1(2)所述，其特征在于将PKM2的多肽序列偶联至生物素上，与固定有链唑霉素(strepavidin)的酶标板结合，由于多肽序列的片段较小，具有高特异性和亲和力的抗体才能有较强的结合，因此可以减少非特异性抗体的结合，提高免疫效果。
4.如权利要求书1(3)所述，其特征在于合成PKM2的9个多肽的独特氨基酸序列，序列如下：1)Biotin-IYHLQLFEEL，2)Biotin-RRLAPITSDP，3)Biotin-TE ATAVGAVE，4)Biotin-ASFKCCSG，5)Biotin-AIIV LTK，6)Biotin-LFEELRRLAP，7)Biotin-ITSDPTEATA，8)Biotin-VGAVEASFKC，9)Biotin-CSGAIIVLTK。这些具不同特异性的抗原，可用于筛选不同表位的抗体。
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