[发明专利]一种快速从天然产物中筛选脂肪酶抑制剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速从天然产物中筛选脂肪酶抑制剂的方法。

背景技术

抗生素的发明以及成功的应用使严重威胁人类健康的疾病谱从传染性疾病转变为非传染性慢性病，这些慢性病，如糖尿病、高血压、血脂异常、缺血性心脏病和癌症等，成为导致人类死亡的第一杀手。现代科学已经揭示出多种慢性疾病与肥胖密切相关。

目前全球肥胖人群日趋增多，超过十亿的人偏胖，大约有三亿的人为肥胖患者。据2011年3月统计显示，中国肥胖人数已过1亿，目前肥胖增加的速度列为全球第二，已严重影响了国人的健康和经济的发展。不良的饮食习惯和生活方式导致肥胖的发生率呈现逐年增长的趋势，每年用于肥胖的直接医疗开支及相关疾病的花费正在迅猛增长，肥胖已成为严重危害人类健康的公共卫生问题。

控制肥胖，不仅可以改善生活质量，更重要的是预防慢性病的发病率以及降低其对人类造成的危害性。依靠药物减肥由于长期使用会给患者带来多种毒副作用。因此，从天然产物，如食品、饮品等中筛选具有减肥作用的产品，对于有效的预防肥胖和减轻其对人类的危害具有十分重要的现实意义。

肥胖的本质是能量摄入大于消耗而造成体内脂肪过量增加，通过限制饮食中的能量摄入量或增加运动消耗能量减肥很难持久，因此，减肥是肥胖者一个十分美好的愿望。而机体对能量物质的吸收，如油脂，依赖于脂肪酶对脂类物质的水解为前提。若在日常饮食中有意识的食用一些对脂肪酶有抑制作用的食品、饮品，会有效地控制机体对能量的摄入，起到类似于减肥药物的作用，但毒副作用远远小于减肥西药，这对于主动控制肥胖、减少体重有十分积极地意义。

如何快速便捷的从众多的天然产物中筛选出含有脂肪酶抑制剂的食品、药品，是实现主动控制体重的关键。按照传统方法，需要对天然产物进行成分分析，找到和脂肪酶抑制剂结构相似的成分，进行试验，测定其是否具有脂肪酶抑制剂活性，但该方法复杂繁琐，成本高昂，不适合大规模筛选。

本发明是为了克服现有减肥西药毒副作用明显，而限制饮食或运动消耗的方式很难长久坚持因而控制效果不显著等不足之处，提供了一种从天然产物中通过筛选具有脂肪酶抑制剂的方法来筛选产品的减肥作用。该方法具有费用低、速度快，避免了动物实验周期长的缺点，使减肥，控制体重在不干扰日常工作、作息的基础上实现，从而更加经济、实用有效。

发明内容

本发明提供了一种从天然产物中筛选具有脂肪酶抑制作用的产物的方法。

本发明包括以下操作步骤：

步骤1，待测样品的配制

步骤2，反应底物的配制

步骤3，脂肪酶的配制

步骤4，将配制好的待测样品，反应底物，脂肪酶混合后进行反应

步骤5，测定脂肪酶活性，计算抑制率。

其中步骤1中所述待测样品选自天然产物，动物，植物，微生物，岩石，油脂，胶体物质等。

优选中药产物，可食用的食物，保健品，饮料等。

特别优选的是具有药用价值的中草药产物，药食同源的产物，如，中药材，茶叶等。

步骤1中所述待测样品的配制，采用常规方法提取。如压榨、有机溶剂提取或水提取，可将提取物直接配制成一定浓度的液体，或提取得到的产物进一步经过萃取，层析，沉淀等过程，得到比较纯的提取物再配制成一定浓度的液体，配制成的液体采用的溶剂包括有机溶剂，水，缓冲溶液等，优选缓冲溶液，如PBS缓冲液或磷酸缓冲液。如将普洱茶用水提取后，浓缩得到浓缩液，再加入磷酸缓冲液配制成待测普洱茶溶液，浓度以生药计算为1mg-1000mg/mL。

其中步骤2中所述反应底物为2，4-二硝基苯酚丁酸酯(DNPB)。

步骤2中所述反应底物的配制，方法如下：称取1-10g的DNPB溶于5-50mL的缓冲液中，优选磷酸盐(PBS)缓冲液。

优选的反应底物的配制，方法如下：称取5.42g的DNPB溶于10mL的PBS缓冲液中。

其中步骤3中所述脂肪酶选用胰脂肪酶。

步骤3中所述脂肪酶溶液的配制，方法如下：用0.1-0.5mol/LpH6-7的磷酸盐缓冲液配置成100-200U/mL脂肪酶溶液。

优选的脂肪酶溶液的配制，方法如下：0.1mol/L pH6.8的磷酸盐缓冲液配置成200U/mL脂肪酶溶液。

其中步骤4中所述反应条件为：37℃下反应3-15min，优选5min。

其中步骤5中所述测定不同时间脂肪酶活性，测定方法如下：

反应结束后，取适量反应溶液，使用紫外分光光度计，于360nm测定反应体系的OD(光密度)值。