[发明专利]基于流式细胞术的精子质量评估方法

权利要求书

1.基于流式细胞术的精子质量评估方法，包括如下步骤：首先以透膜的核酸荧光染料及不透膜的核酸荧光染料与待检标本共同染色，然后以荧光标记单克隆抗体与染色后的待检标本孵育，进行流式细胞检测，得出最终检测结果，所述荧光标记单克隆抗体能与精子顶体膜反应，所述荧光标记单克隆抗体与透膜核酸荧光染料、不透膜的核酸荧光染料的激光激发光波长差距均为100～200nm，荧光散射波长差距均为75～150nm。

2.根据权利要求1所述的基于流式细胞术的精子质量评估方法，其特征在于：荧光标记单克隆抗体与染色后的待检标本孵育后，加入荧光微球，再进行流式细胞检测。

3.根据权利要求1所述的基于流式细胞术的精子质量评估方法，其特征在于：所述透膜核酸荧光染料为Syto16，不透膜的核酸荧光染料为7-AAD，荧光标记单克隆抗体为APC标记CD46单克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的基于流式细胞术的精子质量评估方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

1)取液化的精液标本，洗涤，制成细胞悬液； 

2)向细胞悬液中依次添加终浓度均为2～5 mM的Syto16、7-AAD，37℃下染色，洗涤； 

3)加入终浓度为1～3 mM的APC标记CD46单克隆抗体，37℃下孵育，洗涤；

4)加入荧光微球，重悬，上流式细胞仪检测，根据检测数据，得出最终检测结果。

5.根据权利要求4所述的基于流式细胞术的精子质量评估方法，其特征在于： 荧光微球的直径为10 μm。

6.根据权利要求4所述的基于流式细胞术的精子质量评估方法，其特征在于：步骤2）孵育时间为2～5 min。

7.根据权利要求4所述的基于流式细胞术的精子质量评估方法，其特征在于：步骤3）孵育时间为20～30 min。

8.根据权利要求4所述的基于流式细胞术的精子质量评估方法，其特征在于：步骤1）细胞悬液的细胞数为(1～5)×10⁶个。