[发明专利]人参皂甙Rg3、多糖及灵芝多糖的组合物制备及其应用

说明书

技术领域

    本发明属于医药卫生技术领域，具体涉及获得具有较高纯度人参、灵芝多糖，较好药理活性的人参皂甙提取物的制备方法，以及该多糖皂甙组合物用于免疫调节方面的应用。

背景技术

  人参，是一种半遮阴型多年生五加科植物，作为一种名贵药材，广泛应用于全世界89个国家和底物，受惠人口超过十亿。现代科学证明，人参当中的多种人参皂甙和人参多糖是主要活性成分，具有滋补强壮、延缓衰老、抗辐射等功能，对心脑血管疾病、中枢神经系统、内分泌系统等具有良好的调节作用。其中，人参皂甙Rg3被认为生物活性最为显著，多种人参处理工艺都以提高Rg3含量为目标[J Agric Food Chem 2006,54:9936-9942]。其中，新鲜人参经九次蒸熟与九次熟成工序，制成黑参[CN 101442913]，其低糖皂甙Rg2、Rg3、Rh2和CK均有显著增加[J Pharm Biomed Anal 2009, 51:15-22]。金凤燮等采用淀粉酶、纤维素内切酶、霉菌浸出液作为酶源，浸泡人参提取物后，再利用水、乙醇或甲醇提取皂甙，提高了皂甙的总回收率[ZL96115151]。然而，这类处理工艺仅局限于人参提取物，而没有扩展到整只鲜人参、生晒参、红参等初加工原材料来直接处理的过程。同时，也忽视了对另一种重要药用成分，人参多糖的提取。该成分是一种高分子酸性多糖，主要成分为半乳糖醛酸，具有增强人体免疫力的功效[Pharmaceutical Research 1996, 13:1196-1200]。

  传统中医药认为灵芝具有补气安神、平咳固喘等疗效，现代研究表明灵芝多糖是其主要药理活性成分，并被中国药典列为质量控制标准。灵芝多糖大多为异多糖，除葡萄糖外，还含有少量木糖、岩藻糖、半乳糖等等。其中，最主要的葡聚糖是由三股单糖链构成的，呈螺旋状立体结构，大多为β型结构，少数为α型没有药理活性的结构。近期研究表明，灵芝多糖成分能刺激淋巴细胞高表达IL-2、IL-10、以及TNF-α，具有免疫调节作用[Planta Med 2010, 76: 223–227]。另一项研究表明岩藻糖是人体免疫受体识别细菌和真菌的标记，免疫受体会与这种微糖绑定来对抗感染。人体内葡萄糖水平一旦过高，其就会代替岩藻糖绑定免疫受体，从而妨碍免疫受体识别感染性细菌和真菌。如果能通过适当的生物转化技术，提高灵芝多糖产品中可吸收岩藻糖含量，势必有助于增强其免疫调节活性。

一般而言，多糖的提取方法局限于水提醇沉的生产工艺，即利用多糖在热水中溶解度高，但在高浓度的乙醇中会析出沉淀的特性来提纯。然而，这种方法存在着多糖提取效率低，提取物中含有大量杂蛋白和色素等缺陷[CN 1241947]。周考文等人采用人参粉碎后超声的方法，节省了提取时间，多糖提取效率比传统方法提高了两倍[CN 101250234.B]。为了通过适当提取工艺，同时得到人参皂甙提取物和人参多糖提取物，刘莉等人采用乙醇抽提后，对残余料渣水提的方法，分别获得两种具有重要药用价值的物质[CN 1821275]。然而，该工艺并没有使得重要人参皂甙活性成分Rg3含量明显提升。在灵芝多糖提取方面，张劲松等采用灵芝实体为原料，通过水提后直接超滤的方法，脱色后冻干获得高纯度灵芝多糖[CN 10193358]。由于灵芝属于珍稀药材，近些年来，国内外研究者逐渐把目光转向通过微生物发酵的方式，获得灵芝多糖等要用活性成分。杨志坚等人采用肉灵芝发酵的方法，通过向发酵液中加入乙醇，获得灵芝多糖[CN 100506996C]。毛健等人利用灵芝菌种发酵，发酵液中加入乙醇，告诉离心醇沉液，获得灵芝多糖[CN 102021212]。这些方法均没有涉及通过糖苷酶水解，辅助提取多糖的工艺技术。

发明内容

    本发明的目的是提供一种简单、高效、低成本将大批量天然人参、灵芝产品转化为具有免疫调节活性的药用组合物的制备方法。

为了实现上述目的，本发明的人参多糖及高含量人参皂甙Rg3提取物的制备方法按照以下工序来进行：

（1）    原料清洗：在保持人参外型完整的情况下，保留老皮将其水洗干净，去除表面泥沙及其它附着物。

（2）    糖苷酶水解：完整人参经排针扎孔，浸没于含有pH3.0~11.0的缓冲液的培养锅中，以每千克原料0.1~100个酶活单位的比例，加β-D-木糖苷酶反应，该pH值范围内可以保持β-D-木糖苷酶活性维持在较高的水平；同时，由于糖苷酶酶解工序中使得大量人参皂甙从多糖成分中剥离出来，减少了沸水加工过程中对皂甙成分的破坏。