[发明专利]提高疫苗诱导的细胞毒性T细胞反应的治疗性疫苗

说明书

 

技术领域

本发明涉及一种用于慢性病毒感染、癌症的预防和治疗的疫苗，尤其是一种提高疫苗诱导的细胞毒性T细胞反应的治疗性疫苗。

背景技术

慢性感染某些病毒可以引起癌症。感染人乳头瘤病毒可以引起宫颈癌，而乙型肝炎感染与肝癌的发生有关。虽然预防慢性病毒感染的疫苗，如乙型肝炎病毒（HBV）疫苗，人乳头瘤病毒疫苗（HPV）已经在临床应用，但是针对已经感染慢性病毒病人的治疗性疫苗研究，仍然处于起步阶段，疫苗诱导的细胞毒性T细胞不足以杀死病毒感染细胞或癌细胞。

慢性病毒感染可以抑制固有和特异性免疫反应，而影响治疗性疫苗的效率。例如：病毒特异性调节T细胞可影响疫苗特异性细胞毒性T细胞（CTL）的产生和治疗效果。HPV 核壳蛋白L1诱导产生分泌白介素10的L1特异性调节T细胞。HPV早期蛋白E7，E6 特异性调节T细胞存在于病人体内。病毒蛋白如HPV 16 E5 蛋白可以减少MHC I分子在感染细胞膜上的表达；HPV16 E7 蛋白影响干扰素的激活，HPV16 感染部位白介素10（IL10），转移生长因子β（TGFβ）水平升高，这些因素均可降低CTL对病毒感染细胞的杀伤作用。因此，有效的HPV治疗性疫苗依赖于以下3个因素: 1、在HPV感染者体内诱导产生高质，足够的CTL细胞和其它效应T细胞；2、吸引CTL细胞到病毒感染部位；3、CTL细胞克服病毒感染部位的免疫抑制因素，杀伤病毒感染细胞。

    病毒抗原暴露的小鼠抑制治疗性疫苗CTL反应：患者感染病毒后，常常产生对病毒抗原的无效的体液或/和细胞免疫反应。慢性乳头瘤病毒感染病人产生针对早期蛋白E6，E7和晚期蛋白L1的细胞和体液免疫反应。而乳头瘤病毒治疗性疫苗常常使用E7，E6和L1基因或基因产物治疗慢性乳头瘤病毒感染者。因此，非常有必要研究慢性病毒感染个体中对病毒抗原已有的免疫性对治疗性疫苗的影响。PV L1核壳蛋白（L1VLPs）致敏（primed)的小鼠，在接种携带HPV16E7 CTL，人免疫缺陷病毒（HIV）CTL 决定簇的PV嵌和型L1的蛋白（L1E7，L1P18）治疗性疫苗后，与未致敏小鼠相比，其E7，HIV P18特异性的CTL细胞分泌IFNγ受到抑制（参见图1，图中表明，HPV病毒蛋白致敏的个体对治疗性疫苗的反应与幼稚（naive）个体不同）。 

阻断IL10可以增强治疗性疫苗的CTL反应。如果PV L1蛋白致敏（primed) 的小鼠是IL10缺陷鼠，在接种携带HPV16E7 CTL 决定簇的PV嵌和型L1的蛋白治疗性疫苗后，与未致敏小鼠相比，其E7特异性的CTL细胞产生IFNγ则不受到抑制。如果在免疫致敏小鼠时同时阻断IL10，E7 特异性CTL也不受到抑制（参见图2A）。

使用另外一抗原系统卵蛋白/脂多糖（OVA/LPS），重复了上述结果（参见图2B）。IL10与LCMV（lymphocytic choriomeningitis），西尼罗河病毒（West Nile Virus）病毒感染的清除密切相关。DNA疫苗免疫时阻断IL10，可以提高疫苗诱导的T细胞反应，清除小鼠LCMV病毒感染。

综上所述，IL10 与慢性病毒感染密切相关，治疗性疫苗如果在免疫时阻断IL10，可以提高疫苗诱导的T细胞反应，清除慢性病毒感染，阻断宫颈癌的发生。

抗原特异性的，分泌IL10、IFNγ的CD4+ T细胞可能抑制致敏小鼠对治疗性疫苗的CTL反应。如果用特异性抗体将PV核壳蛋白致敏的小鼠体内的CD4+T细胞删除，让新生CD4+T细胞在体内重新出现后免疫小鼠，治疗性疫苗诱导的CTL分泌IFNγ反应则不受抑制；体外实验显示，PV核壳蛋白致敏的CD4+T细胞在受到抗原刺激后，分泌大量IL10，这些细胞表达膜GITR（Glucocorticoid induced TNF receptor related protein）（参见图3A）。OVA/LPS致敏的小鼠CD4也分泌IL10，表达GITR（参见图3B）。

上述结果表明，致敏小鼠对治疗性疫苗的CTL反应的IL10由抗原特异性的CD4+GITR+T 细胞分泌。这些细胞同时还分泌 IFNγ。致敏小鼠如果是IFNγ受体缺陷小鼠，对治疗性疫苗的CTL反应也不受抑制。体外实验显示，IFNγ促进抗原特异性CD4+GITR+T细胞分泌IL10。

发明内容