[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法和其应用

权利要求书

1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述检测试剂盒含有：包被猪IgM单克隆抗体的酶标板、封闭液、样品稀释液、检测用抗原、酶结合物、浓缩洗涤液、酶底物A溶液、酶底物B溶液和终止液，其中，所述检测用抗原为纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒，所述的酶结合物为辣根过氧化物酶-抗PRRSV抗体酶结合物。

2.根据权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述的包被猪IgM单克隆抗体的酶标板孔包被猪IgM单克隆抗体的包被量为0.1μg-1μg/孔，包被稀释液为0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，其中，所述碳酸盐缓冲液的pH9.6。

3.根据权利要求2所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述碳酸盐缓冲液的组成为，每升碳酸盐缓冲溶液中含有1.59g Na₂CO₃和2.93g NaHCO₃。

4.根据权利要求1-3任一项所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述封闭液选自质量浓度为1-10％的BSA、质量浓度为1-10％的脱脂牛奶的任一种或其组合。

5.根据权利要求1-4任一项所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述样品稀释液由质量浓度为0.1-10％牛血清白蛋白和含有0.01-0.05％NaN₃的磷酸盐缓冲液组成，其中，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.01mol/L，pH7.2-7.4。

6.根据权利要求1-5任一项所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述浓缩洗涤液为含有0.5v/v％吐温-20的磷酸盐缓冲溶液，其中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH7.2-7.4。

7.根据权利要求1-6任一项所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述的酶底物A溶液为1％的3，3’-5，5’-四甲基联苯胺溶液；所述的酶底物B溶液为含有0.012％双氧水的乙酸钠缓冲溶液，其中，乙酸钠缓冲溶液的浓度为1％，pH5.0。

8.根据权利要求1-7任一项所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述终止液为1mol/L H₂SO₄溶液。

9.根据权利要求1-8任一项所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述试剂盒中还含有阳性对照液和阴性对照液，其中，所述的阳性对照液用样品稀释液100倍稀释抗PRRSV IgM抗体的猪阳性血清配制而成；所述的阴性对照液用样品稀释液100倍稀释不含有抗PRRSV IgM抗体的猪阴性血清配制而成。

10.根据权利要求1-9任一项所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述纯化的PRRSV抗原的制备方法为：用PRRSV NVDC-JXA1株在Marc-145细胞上培养、扩增，经冻融，超声波破碎后，离心去沉淀，上清超滤浓缩，经蔗糖梯度离心纯化，-40℃保存，作为包被用PRRSV抗原。