[发明专利]冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备方法。

背景技术

b型流感嗜血杆菌结合疫苗，由纯化的b型流感嗜血杆菌荚膜多糖与破伤风类毒素共价结合而成。b型流感嗜血杆菌是儿童鼻咽部常见的共生细菌，在应用疫苗前，大多数儿童都会在某段时期携带Hib，有时携带数月，但细菌定植率依年龄与社会经济状况不同相差很大。在Hib疫苗接种率高的地区，由于Hib结合疫苗的群体免疫作用，细菌在鼻咽部的定植率非常低。尽管只有小部分携带者会发展为临床病例，但由于Hib是通过呼吸道分泌物的飞沫传播的，携带者在传播疾病方面有重要意义。

Hib疾病主要表现为儿童肺炎和脑膜炎，在尚未开展大规模Hib疫苗接种的地区，Hib疾病是一个主要的公共卫生问题。据2006年WHO公告，全球每年至少有300万严重病例发生，约38.6万死亡。Hib发病与死亡多见于发展中国家，疾病负担在4～18月龄儿童最为严重，但小于3月龄和大于5岁儿童也偶尔发病。在未免疫人群，Hib是1岁以内儿童非流行性细菌性脑膜炎的主要病因。即便及时给予足量的抗生素治疗，3～20%的Hib脑膜炎患者仍会死亡。在医药卫生资源不足的地区，Hib脑膜炎病死率会更高，幸存者中神经系统后遗症也很常见，约占比例30～40%。Hib感染的其他重要但不常见的临床表现有：败血症、化脓性关节炎、骨髓炎、心包炎、蜂窝组织炎和会厌炎（特别是工业化国家）。如果在正常情况下无菌的体液或组织如血液、脑脊液、腹腔液、胸腔液或肺吸出物中检测到Hib细菌，则成为侵袭性Hib疾病。

在工业化国家和发展中国家，疫苗接种都是唯一能迅速降低Hib疾病发病的公共卫生措施，将Hib疫苗纳入儿童常规疫苗规划的国家多数在数年内就可以实际消除Hib严重病例。由于细菌对一些最有效的抗生素耐药性正在不断增加，通过疫苗预防Hib疾病就变得越来越重要了。

国外于20世纪80年代后期研制成功了安全有效的预防用Hib结合疫苗，中国也相继成功研制出Hib结合疫苗，并于2003年经国家食品药品监督管理局SFDA批准上市销售。然而，目前国内的Hib结合疫苗均为液体剂型，存在着保存、运输及使用不方便，稳定性较差，疫苗有效期较短等缺点。

发明内容

本发明的目的在于解决现有b型流感嗜血杆菌结合疫苗的不足，提供一种冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备方法，克服传统液态b型流感嗜血杆菌结合疫苗保存、运输及使用不方便，稳定性差，有效期有限等缺点。 

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备方法，它包括以下步骤：

（1）制备b型流感嗜血杆菌结合疫苗半成品溶液，它包括以下不同溶液组分进行混合的步骤：

（Ⅰ）将蔗糖溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，蔗糖与多糖结合物的重量比为720～900：0.12～0.29；

（Ⅱ）将乳糖溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，乳糖与多糖结合物的重量比为40～730：0.12～0.29；

（Ⅲ）将甘氨酸溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，甘氨酸与多糖结合物的重量比为40～730：0.12～0.29；

（2）将疫苗半成品溶液置入冻干机中进行冻干，先将冻干机板层温度降至-30～-40℃进行预冻，预冻时间2～4小时；

（3）预冻完成后，将搁板温度降至-30～-45℃后开始抽真空处理；

（4）抽真空处理完成后，将真空状态的冻干机温度调至-30～-35℃，并保持10小时；

（5）搁板以5℃/小时的速度升温至30℃，并维持在30℃的温度3.8～4.2小时；

（6）取出完成冻干的结合疫苗，获得成品。

本发明的有益效果是：通过本方法制成的冻干Hib结合疫苗呈均匀白色粉末状，无异物，可在2～8℃的温度下保存36个月；免疫双扩散法检测Hib结合疫苗与Hib免疫血清及破伤风类毒素免疫血清形成明显沉淀线；多糖含量不低于10ug；高分子结合物为80～100%；多糖分子大小用CL-4B凝胶柱检测K_D值小于0.2；疫苗两针免疫后80%以上的小鼠血清抗Hib CPS IgG的抗体水平高于Cutoff值，符合药典要求；动物安全性试验包括热原质试验、异常毒性试验和过敏原性试验均符合Hib结合疫苗性能规定；用冻干Hib结合疫苗代替传统的液体剂型，具有保存、运输及使用方便，疫苗稳定性好、有效期长等特点。 

具体实施方式

下面结合实施例进一步描述本发明的技术方案：