[发明专利]一种通过环化方式构建测序文库的方法

权利要求书

1.一种通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.将核酸片段与连接组件连接，并以不增加其大小的形式进行环化，得到第一环形分子；所述连接组件含有至少一个酶切识别位点；

B.基于步骤A所述酶切识别位点，利用内切酶对第一环形分子中的核酸片段进行酶切，并将酶切产物与桥联组件连接并环化，得到桥联环化物。

2.根据权利要求1所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述连接组件与核酸片段的大小比值大于等于4。

3.根据权利要求1所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述连接组件的大小大于等于140bp。

4.根据权利要求3所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述连接组件的大小大于等于400bp。

5.根据权利要求1所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述连接组件包括接头和桥序列，所述接头和/或桥序列含有IIs型限制性内切酶识别位点。

6.根据权利要求5所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤：

A1.将核酸片段与接头连接，得到含接头的核酸片段；

A2.将含接头的核酸片段与桥序列连接并环化，得到第一环行分子。

7.根据权利要求6所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述接头包括第一接头和第二接头，所述第一接头含有IIs型限制性内切酶识别位点，所述步骤A1包括以下步骤：

A11.将核酸片段与第一接头连接，得到含第一接头的核酸片段；

A12.利用IIs型限制性内切酶酶切含第一接头的核酸片段，得到含第一接头的酶切产物；

A13.将含第一接头的酶切产物与第二接头连接，得到含接头的核酸片段。

8.根据权利要求7所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述步骤A11包括以下步骤：

A111.对核酸片段进行处理，得到处理过的核酸片段；所述处理方法包括去磷酸化、末端补平、加A尾、加poly A尾中的至少一种；

A112.将处理过的核酸片段与第一接头连接，得到含第一接头的核酸片段。

9.根据权利要求6所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述步骤A2包括以下步骤：

A21.利用特异性切割剂分别对含接头的核酸片段和桥序列进行切割，得到相对应的切割产物；

A22.利用连接酶，将相对应的切割产物连接并环化，得到第一环形分子；

所述接头和桥序列均含有用于切割的识别位点；

所述特异性切割剂能够特异性的识别接头和桥序列的用于切割的识别位点，并对接头、桥序列进行切割。

10.根据权利要求1所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述连接组件含有至少2个IIs限制性内切酶识别位点，所述步骤B具体为：

利用连接组件含有的IIs限制性内切酶识别位点，通过相应的限制性内切酶，对第一环行分子中的核酸片段中对应的两个酶切位点进行切割，并将酶切产物与桥联组件连接并环化，得到桥联环化物。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，在步骤B之后还包括以下步骤：

C.更换内切酶和桥联组件，对步骤B得到的桥联环化物进行酶切、连接和环化，以在核酸片段中插入至少二个桥联组件，得到环形测序文库。

12.根据权利要求11所述的通过环化方式构建测序文库的方法，其特征在于，所述桥联组件含有IIs型限制性内切酶识别位点。