[发明专利]系统性红斑狼疮检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种系统性红斑狼疮的基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估系统性红斑狼疮发生的风险级别，并且指导系统性红斑狼疮高危人群提早预防和治疗。

背景技术

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种较为常见的自身免疫性疾病，其特征为多种自身抗体的产生及免疫复合物的形成，最终由于针对自身的免疫反应造成几乎全身各个系统的损害如循环系统、泌尿系统、消化系统以及中枢神经系统的病变。SLE的病因和发病机制尚未完全明了，目前认为该病属于多基因遗传病，遗传因素及环境因素共同参与本病的发生、发展过程。SLE好发于女性，特别是育龄期妇女，累及心、脑、肾等全身多个重要脏器。据估计，目前我国有SLE患者100多万人，平均患病率位居全球第二位。众多研究发现，该疾病具有较高的遗传倾向，通过分子诊断检测与SLE发生密切相关的基因位点就可以提前评估受检者患SLE的风险，提早预防和治疗。

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen4，CTLA-4)是活化T细胞表面所表达的一种膜融合蛋白，对T细胞的活化起关键的负性调节作用，因此CTLA-4基因成为自身免疫性疾病的一个侯选易感基因。研究数据显示，CTLA-4基因第1外显子A49G多态性除了与SLE的发生密切相关外，还与Graves眼病、白癜风、自身免疫甲状腺病等相关。2004年徐安平等对中国南方地区人群研究结果显示CTLA4基因-1722T/C位点多态性与SLE明显相关，SLE患者TC基因型频率明显高于正常对照组。2009年孟炜课题组对中国南方人群研究发现CTLA-4基因-1722T/C位点与SLE相关，病例组和对照组T/T、C/T、C/C基因型频率有显著差异，SLE患者TT基因频率明显升高。国内外的临床研究数据显示，CTLA-4基因-1722T/C位点多态性除了与SLE的发生密切相关外，还可以作为白癜风、乳腺癌等多种疾病发生的独立危险因素。

亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因是叶酸代谢中的关键基因之一，维持正常的同型半胱氨酸水平。徐晓龑等2007年测定了54例SLE患者和62例正常对照者的Hcy、VitB12叶酸的水平，并检测MTHFR基因677位的多态性。结果显示疾病组CC基因型频率显著低于正常对照组，总的突变T等位基因频率显著高于对照组。2009年，冯磊光等人对52例SLE患者(男5例，女47例；平均年龄37～14.34岁)及78例年龄性别相匹配的健康对照者(男8例，女70例；平均年龄34±8.53岁)作病例-对照研究。结果发现，研究人群中MTHFR 677TT纯合变异型及T等位基因在SLE患者中显著增多，MTHFR基因677TT纯合变异与SLE的发病有关，是SLE的危险因素。CTLA4基因上A49G和T-1772C、MTHFR基因上C677T的3个SNPs可以作为SLE的独立危险因素进行基因检测。

因此，建立简单、快速的系统性红斑狼疮易感基因检测方法，及时筛查出易患系统性红斑狼疮的高危人群，有针对性的进行健康指导，对于保障人类安全健康具有非常重要的意义。

发明内容

基于CTLA4基因上A49G和T-1772C、MTHFR基因上C677T的3个SNPs位点基因型可用来评估系统性红斑狼疮发病风险级别，本发明提供一种系统性红斑狼疮基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测CTLA4基因上A49G和T-1772C、MTHFR基因上C677T的3个SNPs位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等)；

PCR产物纯化组件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA测序反应组件(包括BigDye mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对(每条引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。