[发明专利]系统性红斑狼疮检测试剂盒无效
| 申请号： | 201210086798.7 | 申请日： | 2012-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN102605082A | 公开（公告）日： | 2012-07-25 |
| 发明（设计）人： | 李为为;姜丽 | 申请（专利权）人： | 解码(上海)生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200233 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 系统性红斑狼疮 检测 试剂盒 | ||
1.一种筛查系统性红斑狼疮高危人群的基因无创检测试剂盒，其特征在于：检测CTLA4基因上A49G和T-1772C、MTHFR基因上C677T的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物与DNA检测探针、Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、SAP酶、ExoI酶、BigDye mix、EDTA溶液、70％乙醇溶液、100％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的特异性引物对是指针对CTLA4基因上A49G和T-1772C、MTHFR基因上C677T的3个单核苷酸多态性(SNPs)位点，能特异性扩增出包含这3个SNPs位点的DNA片段的引物对。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的DNA测序引物是针对CTLA4基因上A49G和T-1772C、MTHFR基因上C677T的3个SNPs位点而设计，能通过DNA测序技术特异性检测出上述3个SNPs位点基因型的DNA测序引物。
4.根据权利要求1所示的试剂盒，其特征在于，所含的3对特异性引物序列如下：
(1)CTLA4(A49G)正向引物：5’-CTGAACACCGCTCCCATAAA-3’
CTLA4(A49G)反向引物：5’-GAATACAGAGCCAGCCAAGC-3’
(2)CTLA4(T-1772C)正向引物：5’-CACAGAAGCAAAGAACCCAT-3’
CTLA4(T-1772C)反向引物：5’-TGTATGTGGGTAGGAGATGGA-3’
(3)MTHFR(C677T)正向引物：5’-AGGGAGGCTTCAACTACGC-3’
MTHFR(C677T)反向引物：5’-GCGGTTGAGGGTGTAGAAGT-3’。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所含的3条DNA测序引物序列如下：
(1)CTLA4(A49G)测序引物：5’-CTGAACACCGCTCCCATAAA-3’
(2)CTLA4(T-1772C)测序引物：5’-CACAGAAGCAAAGAACCCAT-3’
(3)MTHFR(C677T)测序引物：5’-AGGGAGGCTTCAACTACGC-3’。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于试剂盒的组分和含量包括：
(1)PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul，25mM dNTP混合液0.2ul， 5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul，20uM特异性引物对，每条引物各0.25ul，ddH2O 19.175ul。
(2)PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶0.75ul，10U/ul ExoI酶0.375ul，ddH2O 3.875ul。
(3)测序反应体系：25％ BigDye mix1ul，3.2uM DNA测序引物1ul，125mMEDTA溶液1ul，100％乙醇溶液15ul，70％乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH2O2ul。
本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。
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