[发明专利]一种适用于猪胰岛的分离提取液及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及了一种分离提取液产品，具体地说本发明是可以改善胰岛分离提取中缺氧程度的分离提取液。

背景技术

胰岛移植是一种极具潜力的胰岛素依赖型糖尿病的临床治疗方法，与胰腺移植相比胰岛移植具有简单、安全、有效、副作用小等优点，因此其应用前景更加广泛。但是人源胰腺供体的短缺是制约胰岛移植治疗的主要问题，而猪胰岛移植是解决胰岛来源最佳的方法[Moon-Kyu Lee.Cell transplantation for endocrine disorders，Advanced Drug Delivery Reviews，2000，42：103-120][Reinhard  G.Islet cell transplantation today.Langenbecks Arch Surg，2007，392：239-253]。但在分离提取胰岛时，会破坏胰岛内外的血管系统。虽然胰岛仅占整个胰腺组织的1-2％，但它接受了整个胰腺组织10-20％的血流量，所以分离过程会使胰岛处于缺血缺氧的不理想状态，其仅能通过梯度驱使的被动扩散来获得氧气及营养[FEM-based oxygen consumption and cell viability models for avascular pancreatic islets.Theoretical Biology and Medical Modelling 2009]。缺氧会引起胰岛细胞死亡，尤其会引起胰岛中心坏死，因此解决由分离而引起的缺氧问题对提高胰岛的存活率及移植成功率有着重要的意义。目前针对胰岛分离提取的研究虽然众多，但是还没有研究者研究开发既能有效分离胰岛又能有效改善胰岛缺氧状态的分离提取液。全氟化碳化合物是一类理想的氧的载体，它与氧之间可以通过范德华力结合，进行物理的被动溶氧，并且全氟化碳中绝大部分的氢原子被氟原子所替代，氟原子浓密的电子云形成保护鞘，抵制各种试剂的接近。由于全氟化碳具有疏水输油性，其磁化率与水接近，呈化学和生物惰性，所以生物安全性较好[王喆，表面活性剂和全氟三丁胺对可移植海藻酸钠/聚赖氨酸/海藻酸钠微胶囊性能的影响，中国组织工程研究与临床康复，2008]。由于全氟化碳对气体的溶解能力高、密度大、易扩散，其在病理状态可释放82％的氧，超过患者自身红细胞的供养能力，并且其不参与人体新陈代谢，使其在生物领域具有潜在的应用价值。由于它在携氧量和生物安全性方面的优势，FDA已批准其进入临床实验[Spahn DR.Current Staus of artificial oxygen carriers，Adv Drug Delivrey，2000，40(3)：143-l 51]。当全氟化碳化合物作为氧运输介质应用时被分散至含水乳剂溶液中直至得到微细分布的乳剂，它交换气体的能力由乳剂中总氧含量确定，氧浓度遵循Henry定律，与氧压成正比[专利200580013930.X].此外全氟化碳化合物可以抑制活性氧的生成，可以从胰腺或胰岛中转移脂溶性物质给全氟化碳，有利于胰腺的保存及胰岛的培养[Use of Perfluorodecalin for Pancreatic Islet Culture Prior to Transplantation：A Liquid-Liquid Interface Culture  System-Prelimina0y Report.Cell Transplantation，2011，20：323-332，]。所以针对于对胰腺灌注，分离提取胰岛，需对全氟碳化合物进行乳化，通过对全氟化碳与乳化剂按照一定比例混合成乳，制备成适合哺乳动物胰岛分离提取的可高载氧的分离提取液，填补了针对原代细胞提取的高载氧的分离提取液研究领域的空白。

发明内容

针对上述问题，本发明提出了一种适用于猪胰岛的分离提取液及其制备和应用

技术方案：本发明采用一种适用于猪胰岛的分离提取液，该分离提取液可以改善分离提取胰岛时而引起的缺氧问题，该灌注液中包含基础培养基或平衡盐溶液，胶原酶P，氯化钙，DNA酶，牛血清白蛋白，全氟化碳，乳化剂，抗菌素。

所述哺乳动物胰岛的分离提取包括人、猴、猪或啮齿类动物等胰岛的分离提取。

该分离提取液中包含基础培养基或平衡盐溶液、牛血清白蛋白、全氟碳化合物、乳化剂、抗菌素；

该分离提取液中的牛血清白蛋白质量浓度为0.5-5％；

该分离提取液中的全氟碳化合物为全氟三丁胺或全氟三丙胺，于提取液中的质量用量在2-60％之间；