[发明专利]一种适用于猪胰岛的分离提取液及其制备和应用

权利要求书

1.一种适用于哺乳动物胰岛的分离提取液，其特征在于：该分离提取液中包含基础培养基或平衡盐溶液、牛血清白蛋白、全氟碳化合物、乳化剂、抗菌素；

该分离提取液中的牛血清白蛋白质量浓度为0.5-5％；

该分离提取液中的全氟碳化合物为全氟三丁胺或全氟三丙胺，于提取液中的质量用量在2-60％之间；

该分离提取液中的乳化剂终用量为0.001-100g/L、抗菌素为青霉素及链霉素，于提取液中的终用量分别为为100u/ml和100ug/ml。

2.按照权利要求1所述的分离提取液，其特征在于：分离提取液中还添加有胶原酶、氯化钙和DNA酶；

该分离提取液中的胶原酶为胶原酶P型试剂，于提取液中的终浓度为0.5-4mg/ml；

该分离提取液中添加氯化钙，其终浓度为0-0.5g/L；该分离提取液中的DNA酶为DNA酶I，其终浓度为0.1-1mM。

3.按照权利要求1或2所述的分离提取液，其特征在于：该分离提取液中的乳化剂可选择终浓度为0.005-100g/L卵磷脂或0.001-100g/L的聚氧乙烯氢化蓖麻油或0.001-100g/L的吐温80或0.05-100g/L的F68中的一种或两种以上。

4.按照权利要求1或2所述的分离提取液，其特征在于：所述基础培养基可选择MEM、RPMI 1640、或DMEM，平衡盐溶液可选择Hank`s液、D-Hank`s液、或HBSS液。

5.一种权利要求1所述分离提取液的制备方法，其特征在于：该分离提取液的制备步骤如下：

无菌条件下，

a.配制水相溶液：采用纯水配置基础培养基或平衡盐溶液的浓缩液，使得溶质浓度为标准情况下的2-5倍，即配置2-5倍浓度的基础培养基或平衡盐溶液；再添加牛血清白蛋白，抗菌素，0.22um无菌过滤；

b.配制全氟碳乳化液：将乳化剂溶于纯水中，再加入全氟化碳，使得全氟化碳化合物、乳化剂、纯水按5-100g∶1-200mg∶100ml的比例混合后采用超声方法，高速搅拌法或高压均化法乳化配制成乳化液；

c.将步骤a与步骤b配制的溶液按照1∶1-1∶4混合后，搅拌，得分离提取液。

6.按照权利要求5所述分离提取液的制备方法，其特征在于：步骤a)的基础培养基或平衡盐溶液中添加胶原酶试剂、氯化钙和DNA酶；

该分离提取液中的胶原酶为胶原酶P型试剂，于提取液中的终浓度为0.5-4mg/ml；

该分离提取液中添加氯化钙，其终浓度为0-0.5g/L；该分离提取液中的DNA酶为DNA酶I，其终浓度为0.1-1mM。

7.按照权利要求6所述分离提取液的制备方法，其特征在于：配制后的乳化液中，基础培养基或平衡盐溶液中溶质的浓度为标准情况下的0.4-2.5倍，胶原酶P试剂为0.5-2mg/ml，氯化钙浓度为0-0.5g/L，DNA酶为0.1-1mM，牛血清白蛋白0.5-3％，青霉素及链霉素100u/ml和100ug/ml，全氟碳化合物为2-60％，乳化剂为0.001-100g/L。

8.一种权利要求1所述分离提取液的应用，其特征在于：该分离提取液可用于哺乳动物胰岛的分离提取。

9.按照权利要求8所述分离提取液的应用，其特征在于：该分离提取液在对胰腺组织进行灌注前需要无菌环境下充氧；该分离提取液适用于对胰腺进行灌注的方式来分离提取胰岛。

10.一种权利要求1所述分离提取液的应用，其特征在于：该分离提取液如不添加酶制剂试剂及氯化钙，但增添终浓度为5％-20％小牛血清，可作为胰岛或微囊化胰岛的短期运输保存液；

或，该分离提取液如不添加酶制剂试剂及氯化钙，但添加终浓度为10％-20％小牛血清，可用于分离后胰岛或微囊化胰岛的的短期培养；

或，该分离提取液如不添加酶制剂试剂及氯化钙，可作为胰岛或微囊化胰岛的移植试剂。