[发明专利]一种降解煤化工废水中苯酚的方法

权利要求书

1.一种降解煤化工废水中苯酚的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

a.种子制备：从枯草芽孢杆菌保存管中挑取一环接入富集培养基中，菌株经活化和扩大培养后，按质量百分比为1~5%的接种量接种于富集培养基中，在温度为20~40℃下好氧培养24~72h，可得用于驯化的降解菌；

b.降解菌的驯化：取上述步骤a制得的种子按质量百分比1~5%的接种量接入含100mg/L苯酚的基础选择培养基中，在温度为20~40℃，搅拌速率为100~130r/min下好氧培养24~72h后，取培养后的培养液按质量百分比1~5%的接种量再接种于含200mg/L苯酚的基础选择培养基中，与上述相同条件下培养24~72h，以此类推，即取前一步骤培养后的培养液按质量百分比1~5%的接种量接种于苯酚含量比前一步骤高100mg/L的基础选择培养基中，与上述相同条件下培养24~72h，最后一次是取前一步骤接种培养后的培养液，按质量百分比1~5%的接种量接种于含1000mg/L苯酚的基础选择培养基中，与上述相同条件下培养24~72h；

c.单菌落的分离：选择上述步骤b浊度最大的培养液，稀释后涂布于含300mg/L苯酚的基础选择固体培养基琼脂平板，在温度为20~40℃下培养24~72h，长出的单菌落在平板上划线纯化2次，得到形态不同的单菌落菌株；

d.降解苯酚种子扩大培养：取上述步骤c制得的不同形态单菌落菌株，分别接入到含300mg/L苯酚的富集培养基中，在温度为20~40℃，搅拌速率为100~130r/min下好氧培养24~72h，可得用于降解苯酚的种子；

e.苯酚降解菌的选择：将上述步骤d制得的降解苯酚的种子，按质量百分比1~5%的接种量分别接入添加0、100、200、……、900、1000mg/L苯酚的煤化工废水中，在温度为20~40℃，搅拌速率100~130r/min下好氧培养24~72h后对苯酚浓度进行测定，选出使含量为0～200mg/L煤化工废水中的苯酚能完全降解的菌株；

f.将上述步骤e选出的苯酚降解菌，接入富集培养基经扩大培养后，按质量百分比1~5%的接种量接入煤化工废水中，在温度为20~40℃，搅拌速率100~130r/min下好氧培养24~72h，即可降解煤化工废水中的苯酚。

2.如权利要求1所述的一种降解煤化工废水中苯酚的方法，其特征在于：所述富集培养基，基础选择培养基，基础选择固体培养基制备方法分别是：

1）富集培养基的制备：将下述重量的原料混合而成即可制得富集培养基：蛋白胨5.0g，牛肉浸出汁3.0g，NaCl 5.0g，MnSO₄·H₂O 0.01g，水1000mL；

2）基础选择培养基的制备：将下述重量的原料混合而成即可制得基础选择培养基：K₂HPO₄ 0.5g，KH₂PO₄ 0.5g，NaCl 0.2g，NH₄NO₃ 1.0g，MgSO₄ 0.2g，CaCl₂ 0.2g，MnSO₄·H₂O 0.01g，水1000mL；

3）基础选择固体培养基的制备：将下述重量的原料混合而成即可制得基础选择培养基：K₂HPO₄ 0.5g，KH₂PO₄ 0.5g，NaCl 0.2g，NH₄NO₃ 1.0g，MgSO₄ 0.2g，CaCl₂ 0.2g，MnSO₄·H₂O 0.01g，琼脂20g，水1000mL；

如权利要求1所述的一种降解煤化工废水中苯酚的方法，其特征在于：所述步骤b的含100、200、……、900、1000mg/L苯酚的基础选择培养基是由基础选择培养基1000mL分别和100、200、……、900、1000mg苯酚混合而成。

3.如权利要求1所述的一种降解煤化工废水中苯酚的方法，其特征在于：所述步骤c的含300mg/L苯酚的基础选择固体培养基是由基础选择培养基1000mL、苯酚300mg和琼脂20g混合而成。