[发明专利]微量游离mRNA提取和富集方法无效
| 申请号： | 201210083189.6 | 申请日： | 2012-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN102676500A | 公开（公告）日： | 2012-09-19 |
| 发明（设计）人： | 刘宝瑞;沈洁;魏嘉 | 申请（专利权）人： | 南京大学医学院附属鼓楼医院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京中新达专利代理有限公司 32226 | 代理人： | 孙鸥;朱杰 |
| 地址： | 210008 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微量 游离 mrna 提取 富集 方法 | ||
1.微量游离mRNA提取和富集方法，其步骤在于：
(1)抽取含微量游离mRNA的液体，两次离心，获取上清；
(2)取上清加入到Trizol LS溶液中，室温震荡；
(3)向其中加入氯仿，剧烈震荡；
(4)离心，吸取水相层至新管；
(5)加入70％乙醇，混匀；将含有乙醇和RNA的液体转移到带有滤网的收集管中，离心；
(6)洗涤滤网和滤网上的RNA；
(7)离心，干燥滤网和RNA；
(8)加无RNA酶水溶解RNA，离心；
(9)加入DNA酶；
(10)终止DNA酶反应，离心，获得最终富集并纯化的RNA，以其为模板，反转录为cDNA，-20℃保存。
2.根据权利要求1所述的微量游离mRNA提取和富集方法，其特征在于步骤(1)中离心机先为3000g，4℃离心10分钟，获得上清后12000g，4℃离心10分钟。
3.根据权利要求1所述的微量游离mRNA提取和富集方法，其特征在于步骤(2)中取750ul上清，加入2250ul Trizol LS溶液中，即上清与Trizol LS的体积比为1∶3，上清的起始量为750ul。
4.根据权利要求1所述的微量游离mRNA提取和富集方法，其特征在于步骤(8)中无RNA酶水的量为33ul。
5.根据权利要求1所述的微量游离mRNA提取和富集方法，其特征在于步骤(9)中加入10×DNA酶缓冲液6ul和1.5ul DNA酶，37℃孵育30分钟。
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