[发明专利]胡杨microRNAs前体的克隆与分析方法无效
| 申请号： | 201210082321.1 | 申请日： | 2012-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN103361346A | 公开（公告）日： | 2013-10-23 |
| 发明（设计）人： | 夏新莉 | 申请（专利权）人： | 北京林业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 | 代理人： | 翟国明 |
| 地址： | 100083 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胡杨 micrornas 克隆 分析 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种胡杨microRNAs前体的克隆与分析方法，包括：
采用PCR技术从胡杨DNA中克隆得到胡杨microRNAs前体序列，并对其进行茎环二级结构分析和命名；
首次在胡杨中同时对miRNA成熟体与前体在脱水与高盐逆境处理下进行表达检测，得出microRNA前体与成熟体之间可能的关系模式，同时发现了一些与脱水，高盐逆境胁迫相关的microRNAs基因。
2.根据权利要求1所述的胡杨microRNAs前体的克隆与分析方法，其特征在于，所述胡杨microRNA前体的克隆包括：
杨基因组DNA提取；
PCR扩增；
目的片段的回收与纯化；
目的片段连入载体及转化；
大肠杆菌单克隆送测。
3.根据权利要求1所述的胡杨microRNAs前体的克隆与分析方法，其特征在于，还包括：不同胁迫处理下胡杨microRNA前体及成熟体的实时定量分析。
4.根据权利要求3所述的胡杨microRNAs前体的克隆与分析方法，其特征在于，所述不同胁迫处理下胡杨microRNA前体及成熟体的实时定量分析，具体包括：
CTAB-PVP法提取胡杨总RNA；
胡杨microRNA前体及成熟体的实时定量RT-PCR引物设计；
胡杨microRNA前体及成熟体的反转录(RT)反应；
胡杨microRNA前体及成熟体的实时荧光定量PCR反应；
PCR数据的标准化与Treeview分析。
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