[发明专利]一种利用紫外分光光度法测定植物中抗坏血酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物生理生化分析领域，具体涉及一种利用紫外分光光度法测定植物中抗坏血酸含量的方法。

背景技术

抗坏血酸，又称维生素C，是动植物体内维持生命所必需的一种物质。抗坏血酸作为细胞内重要的还原物质，它具有维持细胞氧化还原电位，清除活性氧，维持维生素E的还原状态等重要作用。高等动植物体内存在的谷胱甘肽——抗坏血酸氧化还原系统是细胞内的多条电子传递链之一，参与细胞内能量代谢，防止含巯基蛋白质的氧化，延缓细胞衰老的进程。对抗坏血酸的各方面研究方兴未艾，测定各种生物组织中抗坏血酸含量是研究抗坏血酸的合成，代谢及生理作用的必要手段之一。抗坏血酸(维生素C)分为脱氢抗坏血酸和还原型抗坏血酸，相对应的，不同的方法可以测定脱氢型抗坏血酸和总抗坏血酸的含量。目前国家标准中规定的蔬菜水果总抗坏血酸的测定方法为荧光法和2，4-二硝基苯肼法(GB/T5009.86-2003)。国家标准中规定的还原型抗坏血酸的测定方法为2，6-二氯靛酚滴定-乙醚萃取法(GB/T 12143.3-89)和固蓝盐B显色法(GB/T 5009.159-2003)。几种方法适合于食品质量检测固蓝盐B显色法。适用于实验分析的小样品抗坏血酸含量测定方法仅有红菲罗啉显色法和高效液相色谱法。而目前的红菲罗啉显色法精确度不高，而高效液相色谱法操作条件不易控制且较繁琐。而且，上述国标方法采用间接法测定，会受到样品中其他物质的干扰，比如2，6-二氯靛酚滴定法受样品中其它还原物质干扰，固蓝盐B显色法受蛋白质的影响。

发明人考虑采用紫外分光光度法直接测定抗坏血酸含量是最快捷最廉价的方法，但是准确度同样容易受到样品中其他物质的干扰。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用适当的方法矫正检测背景，使该检测准确度得到充分保证的利用紫外分光光度法测定植物中抗坏血酸含量的方法。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种利用紫外分光光度法测定植物中抗坏血酸含量的方法，包括标准样品溶液的制备、标准曲线线性回归方程的获得、待测样品的制备、紫外检测及浓度计算，所述的待测样品的制备、紫外检测及浓度计算包括如下步骤：

a.待测样品的制备：将每2.5～3.5g偏磷酸和7.5～8.5mL乙酸用水定容至100ml得到偏磷酸-乙酸水溶液，将该溶液与待测物匀浆，离心，取上清液即为待测物提取液；取体积相等的两份待测物提取液(分别作为测定组和校正组，两份待测物提取液还可以根据样品中抗坏血酸含量均用偏磷酸-乙酸溶液稀释至待测物提取液体积的2～5倍)，用碱处理法破坏第一份待测物提取液背景的光吸收(即波长为245nm下的吸光度超出紫外分光光度计的测定范围)，第二份待测物提取液加入氯化钠溶液，使其含有的氯化钠浓度与第一份待测物提取液中生成的氯化钠浓度相同；

b.待测样品的紫外检测：采用紫外分光光度法测定两份样品提取液在波长为245nm下的吸光度；

c.待测样品浓度的计算：将“b”步骤测得的两次吸光度的差值作为抗坏血酸含量的测量值，代入标准曲线线性回归方程，计算出待测样品中抗坏血酸的浓度。

待测液用紫外分光光度计测定245nm下的吸光度，两次吸光度的差值(A-B)值代入标准方程求出回归值，即为样品液的抗坏血酸浓度C，样品的抗坏血酸含量为C×V/W，其中V是加入偏磷酸-乙酸水溶液的体积，W为待测样品鲜重。

该方法中所述的碱处理法破坏其中一份待测物提取液背景的光吸收包括以下步骤：向待测物提取液中加入浓度为1～10mol/L的氢氧化钠溶液，优选2～4mol/L的氢氧化钠溶液，将提取液的pH值调节至大于12，混匀后室温放置10～30分钟，再加入盐酸将pH值调回原值，所使用的盐酸浓度优选与氢氧化钠溶液的浓度相同。步骤“a”所述的匀浆时，偏磷酸-乙酸水溶液与待测物采用的比例优选为5ml∶0.2～1g，所述的离心的条件可以为10000～12000(×g)，离心10～20分钟。

所述的标准样品溶液的制备包括以下步骤：用去离子水配制5g/L的抗坏血酸溶液，用偏磷酸-乙酸溶液稀释成多个不同浓度的标准样品溶液，浓度范围为5～50mg/L，即用偏磷酸-乙酸水溶液配制呈浓度梯度的抗坏血酸标准液。

所述的标准曲线线性回归方程的获得是将浓度范围为5～50mg/L的多个不同浓度的标准样品溶液分别采用紫外分光光度法进行检测，检测波长为245nm，将得到的吸光度绘制标准曲线，并根据朗伯-比尔定律计算获得标准曲线线性回归方程。