[发明专利]一种基于拉曼光谱检测人乳腺癌细胞MCF-7的细胞探针复合物及其制备方法

权利要求书

1.一种基于拉曼光谱检测人乳腺癌细胞MCF-7的细胞探针复合物，其特征在于，所述的探针复合物以序列为 5’–GCA GTT GAT CCT TTG GAT ACC CTG G–3’的核酸适体S2.2为模板，其碱基上沉积金/银双金属合金纳米粒子，纳米粒子表面固载拉曼信号分子Rh 6G。

2.根据权利要求1所述的细胞探针复合物，其特征在于，所述的细胞探针复合物其粒径为20～120nm。

3.根据权利要求1所述的细胞探针复合物，其特征在于，所述的细胞探针复合物按以下方法合成：将核酸适体S2.2溶解在pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，加入体积比1~5：1的NaAuCl₄和AgNO₃溶液，混合并搅拌均匀，在暗处放置12小时以上，置于紫外灯下光照5 min至60 min，形成Au-Ag-aptamer纳米复合物；将Rh 6G溶液加入到Au-Ag-aptamer纳米复合物分散液中，避光搅拌后离心处理，用PBS洗涤除去未吸附的Rh 6G分子，得到所述的探针复合物。

4.一种权利要求1所述的人乳腺癌细胞MCF-7的细胞探针复合物的制备方法，其特征在于，将序列为 5’–GCA GTT GAT CCT TTG GAT ACC CTG G–3’ 的核酸适体S2.2溶解在pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，加入体积比1~5：1的NaAuCl₄和AgNO₃溶液，混合并搅拌均匀，在暗处放置12小时以上，置于紫外灯下光照5 min至60 min，形成Au-Ag-aptamer纳米复合物；将Rh 6G溶液加入到Au-Ag-aptamer纳米复合物分散液中，避光搅拌后离心处理，用PBS洗涤除去未吸附的Rh 6G分子，得到所述的探针复合物。

5.根据权利要求4所述的人乳腺癌细胞MCF-7的细胞探针复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将序列为 5’–GCA GTT GAT CCT TTG GAT ACC CTG G–3’的核酸适体S2.2用0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）溶解，浓度为300 ng/mL；

2）将1mol/L NaAuCl₄和1mol/L AgNO₃溶液按体积比1~5：1混合，并加入到步骤1）中的核酸适体溶液中，在4℃下连续搅拌0.5–2小时，并在暗处避光保存12h以上，使Au³⁺和Ag⁺吸附到核酸适体的碱基上，得到Au³⁺-Ag⁺-aptamer复合物；

3）将Au³⁺-Ag⁺-aptamer复合物在波数为254 nm的紫外灯下光照5min-60min，溶液颜色由无色逐渐变为蓝色，得到Au-Ag-aptamer纳米复合物；

4）将Rh 6G溶液加入到Au-Ag-aptamer纳米复合物分散液中，控制Rh 6G的最终浓度为1μmol/L，在4℃下避光搅拌1h，离心处理后用0.1 mol/L PBS溶液（pH 7.4）洗涤去除未吸附的Rh 6G分子，得到所述的探针复合物Rh 6G-Au-Ag-aptamer。

6.根据权利要求5所述的人乳腺癌细胞MCF-7的细胞探针复合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤2）中，混合液中Ag⁺与适体DNA的碱基的物质量比为1:5。