[发明专利]用于甲型肝炎病毒核酸捕捉、检测和定量的寡核苷酸的鉴定

权利要求书

1.一种长度不超过60个核苷酸的游离寡核苷酸，包含：

(a)具有选自SEQ ID NOs：1、2和3的序列中至少10个连续核苷酸的核苷酸序列；

(b)与(a)的核苷酸序列有90％一致性的核苷酸序列；或者

(c)(a)和(b)的互补序列。

2.如权利要求1所述的寡核苷酸，其中的寡核苷酸是具有选自SEQ ID NOs：1、2和3的序列中至少10个连续核苷酸的核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的寡核苷酸，其中的核苷酸序列含有SEQ ID NO：1。

4.如权利要求1所述的寡核苷酸，其中的核苷酸序列含有SEQ ID NO：2。

5.如权利要求1所述的寡核苷酸，其中的核苷酸序列含有SEQ ID NO：3。

6.如权利要求5所述的寡核苷酸，该寡核苷酸在其5’和/或3’末端还含有可检测标记物。

7.如权利要求6所述的寡核苷酸，其中的可检测标记物是选自下列一组的荧光标记物：6-羧基荧光素(6-FAM)、四甲基罗丹明(TAMRA)和2’，4’，5’，7’，-四氯-4-7-二氯荧光素(TET)。

8.用于扩增甲型肝炎病毒核酸的一对引物，所述的引物对分别由含SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：2的引物构成。

9.一种检测生物样品中甲型肝炎病毒(HAV)的方法，该方法包括：

从怀疑含有HAV的生物样品中分离核酸；

用至少两个来源于HAV基因组5’UTR区的引物扩增所述分离核酸，其中每个引物的长度为10-60bp，并且分别与所述分离核酸的正义链和反义链的部分序列具有足够的互补性以与之杂交；以及

检测扩增的核酸，如有扩增的核酸则表明样品中存在HAV。

10.如权利要求9所述的方法，其中，(a)引物之一含有SEQ ID NO：1中的至少10个连续核苷酸，另一个引物含有SEQ ID NOs：2中的至少10个连续核苷酸，或者(b)引物序列与(a)所述核苷酸序列具有90％的一致性；以及

检测扩增的核酸，如有扩增的核酸则表明样品中存在HAV。

11.如权利要求9所述的方法，其中，将核酸从生物样品中分离的方法包括：

(a)使结合了含捕捉核酸的固相支持物与生物样品在杂交条件下接触使靶核酸链与捕捉核酸杂交；以及

(b)从样品中分离固相支持物。

12.如权利要求11所述的方法，其中的固相支持物包含小珠。

13.如权利要求12所述的方法，其中的小珠是磁珠。

14.如权利要求13所述的方法，其中分离、扩增和检测在一个容器内进行。

15.如权利要求11所述的方法，其中的捕捉核酸含有一种或多种寡核苷酸，其中每种寡核苷酸的长度都不超过60个核苷酸并含有选自SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14的序列中的至少10个连续核苷酸。

16.如权利要求15所述的方法，其中的捕捉核酸在其3’或5’端还含有一个约15-25个核苷酸的同聚物链，所述同聚物链选自：聚A、聚T、聚G、聚C和聚U。

17.如权利要求16所述的方法，其中的同聚物链是聚A链。

18.如权利要求9所述的方法，其中扩增方法包括PCR、转录介导的扩增(TMA)或TaqMan。

19.如权利要求18所述的方法，其中扩增方法包括TMA。

20.如权利要求18所述的方法，该方法还包括利用含可检测标记物的寡核苷酸探针检测扩增序列的步骤，其中寡核苷酸探针的长度不超过约60个核苷酸并含有SEQ ID NO：3中的至少10个连续核苷酸。

21.如权利要求20所述的方法，其中探针在其5’末端和3’末端含有可检测标记物。