[发明专利]一种低拷贝基因的分离方法

权利要求书

1.一种低拷贝基因的分离方法，其特征在于，具体步骤为：

第一步：将含至少两种不同拷贝数的单链RNA的基因群或样品中低拷贝的至少一种单链RNA作为待分离靶基因，设计一段与待分离靶基因互补的相辅RNA特异性分子，称为驱使RNA分子；

第二步：将第一步中所述的驱使RNA分子与待分离的单链RNA进行退火形成双链；

第三步：用RNA酶消化第二步所得的退火后样品；

第四步：纯化第三步所得的RNA酶未消化的双链靶基因产物，得到待分离靶基因分子。

2.如权利要求1所述的低拷贝基因的分离方法，其特征在于，第三步中所述的RNA酶为RNaseT1。

3.如权利要求1所述的低拷贝基因的分离方法，其特征在于，第四步中所述的纯化方法为酚氯仿抽提/乙醇沉淀法。

4.如权利要求1所述的低拷贝基因的分离方法，其特征在于，第一步中所述的驱使RNA分子序列的设计方法为：以待分离靶基因序列为模板，分析其保守区，设计模板避开与其它基因或宿主同源的基因序列，寻找与靶基因互补，长度至少为19个核苷酸，GC含量为30～60％的序列，同时避免出现连续4个相同的重复碱基。

5.如权利要求1所述的低拷贝基因的分离方法，其特征在于，第一步中所述的所述的单链RNA为单链RNA病毒基因。

6.用权利要求1所述的低拷贝基因的分离方法开发的试剂盒，其特征在于，包括以下成分：待分离靶基因的驱使RNA分子；RNase T1及其反应缓冲液；酚氯仿抽提试剂；乙醇沉淀试剂。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的酚氯仿抽提试剂为体积比为25∶24∶1的酚∶氯仿∶异戊醇试剂。

8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的乙醇沉淀试剂包括：3M醋酸钠溶液，10mg/mL糖原和无核酸酶水。