[发明专利]检测过氧化氢的生物电化学传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测银离子的生物电化学传感器，为三电极体系传感器，其中对电极是铂电极，参比电极是饱和甘汞电极，工作电极为金电极，其特征在于所述的金电极上修饰有模板DNA，模板DNA的序列为：5’-CCTA CGACTGGATGACGATCCCTACGACTGAAAAAAAAAAAA-C₆-SH -3’，该模板DNA在金电极上的修饰密度为：1.2×10¹²个分子/平方厘米～1.2×10¹³个分子/平方厘米。

2.一种制备根据权利要求1所述的检测银离子的生物传感器的方法，其特征在于制备该传感器的工作电极的具体步骤为：

a.将处理过的金电极置于0.5 M H₂SO₄中，在0～1.55 V电压范围内进行循环伏安扫描，扫速设置为100 mV/s，直至达到稳定；

b.用氮气吹干步骤a所得金电极后，将该金电极浸没在缓冲溶液中，倒置15～18小时后，再浸没在1 mM 巯基己醇水溶液中反应0.5～1.5小时，用超纯水冲洗，并用氮气吹干，即得到模板DNA链修饰的金电极；所述的缓冲溶液中含有浓度为1 μM的模板DNA链、10 mM 的Tris-HCl、10 mM的 TCEP以及0.1 M的 NaCl，溶液的pH 为7.4。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的金电极的处理方法的具体步骤为：在待处理的金电极表面滴20 μL水虎鱼溶液，即浓硫酸：过氧化氢的体积比为3：1，反应2 min，用超纯水冲洗干净，氮气吹干；将金电极在5000目砂纸上打磨5 min之后，在含有粒度分别为1 μm、0.3 μm、0.05 μm的氧化铝的砂浆的丝绸上依次抛光至镜面，然后在乙醇、超纯水中依次超声5 min，除去杂质。

4.一种检测银离子的方法，采用根据权利要求1所述的检测银离子的生物传感器，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.将生物传感器中的工作电极金电极浸没在反应缓冲溶液和待测溶液按9：1的体积比形成的混合液中；所述的反应缓冲溶液内含有100 nM 引物DNA，0.5 U/μL BsaBI核酸内切酶，0.05 U/μL Bst核酸聚合酶，50 μM dNTPs, 1 × NE缓冲4 ；所述的为：50 mM KAc, 20 mMpH 7.9的Tris-HAc, 10 mM Mg(Ac)₂，在55～65度反应5～10分钟，用超纯水冲洗，用氮气吹干，得到酶切处理过的金电极；所述的引物DNA序列为：5’-CAGTCCTAGG-3’；

b.在惰性气氛下，将步骤a所得的金电极放入电化学检测缓冲液中，所述的电化学检测缓冲液为含50 μM [Ru(NH₃)₆]³⁺的10 mM Tris-HCl，pH=7.4的检测缓冲液，采用循环伏安法或计时电量法进行电化学扫描，反应缓冲为添加50 μM [Ru(NH₃)₆]³⁺的10 mM pH 7.4 Tris-HCl；采用循环伏安法时的扫描速率为50 mV/s，扫描范围为-0.45 V～0.05 V；采用计时电量法时的脉冲周期为250 ms，初始电位0.2 V，终止电位-0.5 V。