[发明专利]肽核酸原位荧光杂交技术检测弧菌的方法及PNA探针

权利要求书

1.肽核酸原位荧光杂交技术检测弧菌用PNA探针，其特征在于：PNA探针的序列为TAC CCC CCT CTA CAG。

2.肽核酸原位荧光杂交技术检测弧菌的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1）离心收集对数生长期的细菌，用PBS洗涤一次，再用PBS调整菌液浓度至OD₆₀₀=0.5-2.0,取10μl 菌液于98%酒精清洗过的玻片上涂匀，火焰固定，将玻片于80%的酒精中浸泡15分钟，风干；

2）25μl含500pmole/mlPNA的杂交缓冲液滴加于玻片上， PNA探针的序列为TAC CCC CCT CTA CAG，55℃作用1-1.5小时，杂交后玻片于55℃预热的洗涤缓冲液中洗涤2次，每次10分钟，取2～5μl菌液涂片，风干后显微镜观察其荧光亮度及细菌的形态。

3.根据权利要求1所述的肽核酸原位荧光杂交技术检测弧菌的方法，其特征在于杂交缓冲液pH7.5，包括：10%（w/v） 硫酸葡聚糖，10 mM NaCl，30% (v/v)甲酰胺，0.1%（w/v）焦磷酸钠，0.2%（w/v）聚乙烯吡咯烷酮，0.2%（w/v）聚蔗糖，5 mM Na₂EDTA，0.2% (v/v) TritonX-100，50 mM Tris/HCl。

4.根据权利要求1所述的肽核酸原位荧光杂交技术检测弧菌的方法，其特征在于洗涤缓冲液pH10，包括：5 mM Tris，15mM NaCl，0.1% (v/v) TritonX-100。