[发明专利]一种桉叶脂肪酸成分测定方法

说明书

技术领域

本发明属于植物资源的综合开发技术领域，涉及采用现代分析检测仪器检测桉叶化学成分的检测方法，具体的说是一种桉叶脂肪酸成分测定方法。

背景技术

多不饱和脂肪酸(PUFAs)是指含有2个或2个以上双键且碳链长18-22个碳原子的直链脂肪酸。功能性PUFAs根据结构分为两大类：一类是ω-3PUFAs和ω-6PUFAs。ω-6PUFAs的重要性，早在20世纪50年代就开始研究，而ω-3PUFAs的生理调节功能和保健作用，是在近20年才被人们逐渐认识并做了大量的研究工作。药理实验证明，α-亚麻酸、EPA和DHA等ω-3PUFAs都具有降血脂、降血压、促进脂肪代谢、于治疗和防治心血管系统疾病。目前，许多国家都在开发以α-亚麻酸、EPA和DHA为主要成分的保健食品和医疗药品。但ω-3PUFAs的来源较少，主要来自海洋哺乳动物及鱼类的油脂。陆地动物和植物油中含ω-3PUFAs甚微，仅发现亚麻油(15.60％)、紫苏油(56.14％-64.82％)和蚕蛹油(31.63％)等少数植物和动物油含有较高的亚麻酸。目前已有许多ω-3PUFAs产品上市，大都来自海鱼的油脂，来源有限，必须开发新资源，从陆地动植物和微生物油脂中寻找和开发含ω-3PUFAs的原料，使用生产效率更高的生产方法。以满足市场的需要。

桉树在医药、化工等方面利用价值很高。在生物医学方面对桉叶挥发性油(eucalyptus oil)的研究较多。桉树不饱和脂肪酸药用成份研究及产业化应用几乎没有。当前，国内外桉树不饱和脂肪酸面主要研究仅在植物生理方面。根据我们对巨桉茎叶中脂肪酸成分的测试分析，结果表明，膜脂脂肪酸的成分主要有：棕榈酸(16:0)、棕榈油酸(16:1)、油酸(18:1)、亚油酸(18:2)和亚麻酸(18:3).其中，亚麻酸的含量最高，达36.45％-54.86％.各种源中的亚麻酸含量，以巨桉18592号种源含量最高，17562号种源含量最低.其次是棕榈酸含量，达21.86％-29.54％，最高者为巨桉16594号种源，也是不抗寒种源.棕榈桐油酸、油酸、亚油酸的含量较少。以赤桉为材料.结果表明：在赤桉树叶中未检出十四酸，检出了棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸等脂肪。从上述研究和我们的研究表明桉树含有多不饱和脂肪酸的含量是相特别是相当丰富的，特别是含有资源稀少的ω-3PUFAs类型的亚麻酸。目前文献中关于桉树药用成份研究及产业化应用几乎是空白，因此开展桉树不饱和脂肪酸特别是多不饱和脂肪酸产业研究具有巨大的市场和潜力。

发明内容

本发明的目的是为了弥补现有技术存在的不足，提供一种桉叶脂肪酸成分测定方法。

为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案是：该桉叶脂肪酸成分测定方法，按以下步骤：

(1)样品脂肪酸甲酯化或乙酯化

甲酯化：将提取物置于三角瓶中，加入浓度为1％硫酸甲醇溶液，加入量为1g/50mL，充分振荡，55℃水浴加热回流1小时，取出静置后，加入溶剂，加入量为提取物与溶剂之比1g/50mL，振荡均匀并静置30分钟，取上清液放入离心管中10000rpm下离心10分钟，离心后取上清部分作为分析试样；

乙酯化：将提取物置于三角瓶中，加入浓度为0.5mol/L的NaOH乙醇溶液，加入量为1g/10mL，充分振荡，80℃水浴加热5-10分钟，加入三氟化硼-乙醚溶液与无水乙醇配制的混合溶液，加入量为1g/20mL，80℃水浴加热10分钟，取出冷却，加入饱Nacl溶液，加入量1g/70mL，和正己烷，加入量1g/4mL，振摇混匀，静置分层，取上层液进行分析试样；所述三氟化硼-乙醚溶液与无水乙醇配制的混合溶液按体积比1∶3配制；

(2)GC-MS联用仪测定

A.色谱条件

进样口温度253℃，流速1mL/分钟，进样量1.0μL，分流比20∶1；

B.程序升温

初温80℃，保持1.1分钟，以17℃/分钟升至240℃，保持0.7分钟，再以1℃/分钟升至253℃，保持4分钟；

C.质谱条件

EI电离源，电子能量70eV，离子源温度230℃，四极杆温度150℃，EM电压1024V，质量扫描范围40～600u；

(3)标准溶液配制及标准曲线制作

配制各种浓度的标准成分溶液，以标准系列浓度为横坐标，标准目标化合物定量离子峰面积为纵坐标制作标准曲线，然后分别以GC-MS进行测定，并保证检测的GC-MS条件与所述色谱条件、程序升温及质谱条件一致；

(4)脂肪酸定性、定量分析