[发明专利]一种低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法

权利要求书

1.一种低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，其特征在于，包括以下步骤:

1) 将荧光蛋白在特定位点切割成两个蛋白序列片段，荧光蛋白的N端和C端分别命名为FPN和FPC；

2）将待测目标蛋白A的DNA序列与FPN基因序列同时插入到双表达载体中的一个启动子的下游，另一个待测蛋白B和与FPC基因序列同时插入双表达载体中的另一个启动子下游，从而构建了基于双表达载体的双分子荧光互补系统；

3）将同时含有待测目标蛋白A和B的双分子荧光互补系统转染细胞，培养16～24小时以后，使用荧光显微镜观察光源刺激前后是否存在荧光；如果两目标蛋白存在相互作用，则荧光蛋白的N端和C端靠近，从而自发重组为完整荧光蛋白，产生荧光信号；如果没有或者只有极其微弱荧光，证明两目标蛋白之间无相互作用。

2.根据权利要求1所述的低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，其特征在于，所述荧光蛋白为远红荧光蛋白mLumin、黄色荧光蛋白mVenus和青色荧光蛋白mCerulean。

3.根据权利要求1所述的低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，其特征在于，所述双表达载体为pBudCE4.1、pIRES2和pVITR03。

4.根据权利要求1至3任一项所述的低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，其特征在于，所述步骤3）中，当两目标蛋白存在相互作用，荧光蛋白的N端和C端靠近的距离范围为10nm～20nm，从而自发重组为完整荧光蛋白，产生荧光信号。

5.根据权利要求1至3任一项所述的低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，其特征在于，所述荧光蛋白为远红荧光蛋白mLumin时，特定位点为第155号丝氨酸。

6.根据权利要求1至3任一项所述的低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，其特征在于，所述荧光蛋白为黄色荧光蛋白mVenus时，特定位点为155号丝氨酸和173号丝氨酸。

7.根据权利要求1至3任一项所述的低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，其特征在于，所述荧光蛋白为青色荧光蛋白mCerulean时，特定位点为155号丝氨酸和173号丝氨酸。