[发明专利]糖化血红蛋白测量用多层试验片及使用其的测量方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于在诊断现场正确、简便且迅速地对待测试样中的糖化血红蛋白含量进行比色定量的多层试验片以及测量方法。

背景技术

测量糖化蛋白质在进行糖尿病的诊断、预防以及治疗方面非常重要。糖化蛋白质通过在生物体内葡萄糖与血中蛋白质的氨基(主要是末端氨基酸的α-氨基、赖氨酸残基的γ-氨基)发生非酶促反应而生成。由于蛋白质糖化的程度直接与血中葡萄糖浓度(以下称为血糖值)成比例，因此，例如，糖化血红蛋白的情况下，通过测量糖化蛋白质可以掌握约2～3个月内的血糖控制状态，糖化白蛋白的情况下，通过测量糖化蛋白质可以掌握约2～3周内的血糖控制状态。

尤其是作为糖化血红蛋白的一种的血红蛋白A1c在糖尿病的诊断时被认为是最重要的。

作为上述糖化蛋白质的测量方法，已知有高效液相色谱(HPLC)法、免疫法以及酶法等。在现有技术中，高效液相色谱(HPLC)法以及免疫法占据大部分，但是近年来由于酶法可以迅速、大量、正确且廉价地对大量样本进行测量，因此也开始被频繁采用。

有关酶法，例如已知有通过以下的工序对糖化蛋白质进行比色定量的技术(例如，参照专利文献1～4)。

(1)使待测试样中的红细胞溶血以提取出糖化血红蛋白的工序。

(2)使上述糖化血红蛋白与蛋白酶反应从而从糖化血红蛋白的糖化的β链N末端切出糖化氨基酸和/或糖化肽的工序。

(3)使上述糖化氨基酸和/或糖化肽与糖化氨基酸氧化酶反应从而生成过氧化氢的工序。

(4)在过氧化物酶的存在下使上述过氧化氢与氧化还原类显色试剂反应而显色的工序。

(5)根据上述显色对待测试样中的糖化血红蛋白含量进行比色定量的工序。

但是，所涉及的现有技术由于受到可能存在于待测试样中的、并非来自作为测量对象的糖化蛋白质的糖化氨基酸和/或糖化肽的影响，存在表观测量值增加的问题

另一方面，为解决上述问题，发明了测量糖化蛋白质含量的方法(例如专利文献5～9)，该方法的特征在于包括前处理工序，即，在用蛋白酶处理糖化蛋白质之前，通过使糖化氨基酸氧化酶作用于上述可能存在于待测试样中的、并非来自糖化蛋白质的糖化氨基酸和/或糖化肽，从而对上述糖化氨基酸和/或糖化肽进行分解处理。

但是，所涉及的现有技术是稀释待测试样、添加液体状态的试剂、使之在反应容器内发生反应后测量反应液的吸光度的方法，以使用生物化学自动分析装置的方法为主流。但是所述生物化学自动分析装置存在是大型装置且价格昂贵、需要熟练的检测技师来操作、从採血到出报告结果为止的时间较长这些问题，难以适用于POCT(point of care testing(即，临床现场即时检查))。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2002-006519号

专利文献2：特开2004-222570号公报

专利文献3：特开2007-181466号公报

专利文献4：特开2010-148515号公报

专利文献5：特开2007-289202号公报

专利文献6：特开2010-104386号公报

专利文献7：特开2010-110333号公报

专利文献8：特开2010-252814号公报

专利文献9：特开2010-263921号公报

非专利文献

非专利文献1：Clinical Chemistry 43：122390-2396(1997)

发明内容

发明所要解决的技术问题

本发明是以有关现有技术的技术问题为背景进行的。即，本发明的目的为提供一种用于在诊断现场正确、简便且迅速地对待测试样中的糖化血红蛋白含量进行比色定量的多层试验片以及测量方法。更具体而言，本发明的目的在于提供一种不易受可能存在于待测试样中的、并非来自糖化蛋白质的糖化氨基酸和/或糖化肽的影响、且保存稳定性优异的用于对糖化血红蛋白含量进行比色定量的多层试验片以及测定方法。

解决技术问题的手段

本申请发明人发现，通过将糖化氨基酸氧化酶承载在比蛋白酶更靠近待测试样点样面的层上，从而在糖化血红蛋白被蛋白酶切断之前，使糖化氨基酸氧化酶作用于可能存在于待测试样中的、并非来自糖化蛋白质的糖化氨基酸和/或糖化肽，从而能够对上述糖化氨基酸和/或糖化肽进行分解处理。