[发明专利]一种Sublancin抗菌肽的生产方法

权利要求书

1.一种制备Sublancin抗菌肽的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)枯草芽孢杆菌接种培养基进行发酵，过滤发酵液；

2)将步骤1)所得发酵液先后进行离心、阳离子交换层析、疏水层析、尺寸排阻层析、阴离子交换层析，最后超滤浓缩、干燥，即得Sublancin抗菌肽。

2.如权利要求1所述的抗菌肽制备方法，其特征在于步骤1)中发酵液通过陶瓷膜过滤，所述陶瓷膜孔径为20nm。

3.如权利要求1或2所述的抗菌肽制备方法，其特征在于步骤1)中所述的培养基组成为每1L发酵培养基含：玉米粉10-50g，豆粕10-50g，蛋白胨5-20g，葡萄糖(或蔗糖)2-20g，酵母粉0-10g，硫酸铵0-10g，硝酸铵0-10g，硫酸镁0-1.5g，硫酸锰0-1.5g，磷酸盐0-10g，pH 7.0-8.0。

4.如权利要求1或2所述的抗菌肽制备方法，其特征在于步骤1)中枯草芽孢杆菌的接种量为1×10⁶-10⁷CFU/mL，发酵温度为30-37℃，发酵时间为24-32h，通气量600-1000m³/h，转速120-200r/min，pH 6.0-7.0。

5.如权利要求1或2所述的抗菌肽制备方法，其特征在于步骤2)所述的离心条件为10000-15000g离心20-40min。

6.如权利要求1或2所述的抗菌肽制备方法，其特征在于，所述的阳离子交换层析是用缓冲液A平衡离子交换层析柱，将发酵液上样，上样量与阳离子交换层析柱填料的体积比为20∶1，上样流速为50ml/min，之后用缓冲液A冲洗层析柱至紫外吸收达到基线水平，再用缓冲液A和缓冲液B按3∶1的体积比进行等度洗脱，收集洗脱液，所述缓冲液A为20mM NaAc溶液，pH4.0，所述缓冲液B为含20mMNaAc和1M NaCl的溶液，pH4.0。

7.如权利要求1或2所述的抗菌肽制备方法，其特征在于，步骤2)所述的疏水层析步骤是用缓冲液A’平衡疏水层析柱，将离子交换层析收集到的洗脱液与2M NaCl进行等体积混合上样层析柱，上样量与疏水层析柱填料的体积比为2.5∶1，上样流速为30ml/min，用缓冲液A’洗涤色谱柱，直至紫外吸收至基线水平，再用缓冲液B’进行线性梯度洗脱，收集洗脱液；所述缓冲液A’为含20mM NaAc和1M NaCl的溶液，pH4.0，所述缓冲液B’为20mM NaAc，pH4.0。

8.如权利要求1或2所述的抗菌肽制备方法，其特征在于，步骤2)所述的尺寸排阻层析是将疏水层析步骤收集的洗脱液上样，每次进样体积为柱体积的5％，流速为2ml/min，收集抗菌肽洗脱峰。

9.如权利要求1或2所述的高纯度抗菌肽生产方法，其特征在于，将尺寸排阻层析步骤收集的洗脱液上阴离子交换层析柱，流速2ml/min，收集流出的液体。

10.如权利要求1～9任意一项所述的生产方法得到的抗菌肽产品。