[发明专利]一种微波辅助血浆样品前处理方法及在血浆代谢组学分析中的应用

权利要求书

1.一种微波辅助血浆样品前处理方法，该方法是将血浆样品去蛋白处理后，加入肟化反应试剂，在微波能量为60～73W的条件下微波辅助肟化75～125秒后，加入衍生化试剂，在微波能量为200～260W的条件下微波辅助衍生化150～210秒。

2.根据权利要求1所述的微波辅助血浆样品前处理方法，其特征在于，其中的肟化反应试剂是15mg/ml的甲氧胺吡啶溶液，加入量与血浆样品的体积比为1∶2。

3.根据权利要求1所述的微波辅助血浆样品前处理方法，其特征在于，其中的衍生化试剂是N，O-双-三甲硅基三氟乙酰胺∶三甲基氯硅烷为99∶1，V/V，加入量与血浆样品的体积比为1∶2。

4.根据权利要求1、2或3所述的微波辅助血浆样品前处理方法，其特征在于，在微波能量为65W的条件下微波辅助肟化100秒。

5.根据权利要求1、2或3所述的微波辅助血浆样品前处理方法，其特征在于，在微波能量为230W的条件下微波辅助衍生化180秒。

6.一种如权利要求1所述的微波辅助血浆样品前处理方法在血浆代谢组学分析中的应用。

7.根据权利要求6所述的微波辅助血浆样品前处理方法在血浆代谢组学分析中的应用，具体步骤如下：

A.采集动物模型组与对照组血液样品，分离血浆；

B.将血浆进行蛋白沉淀处理，并在氮气流下挥干；

C.加入肟化反应试剂，在微波能量为60～73W的条件下微波辅助肟化75～125秒；

D.加入衍生化试剂，在微波能量为200～260W的条件下微波辅助衍生化150～210秒；

E.待样品冷却后加入内标溶液，混匀，并进样，采用GC/MS进行样品信息采集；

F.对所采集的数据进行格式转化，然后采用XCMS软件对转化后的数据进行峰校正和峰积分等前处理，采用修正80％规则来去除缺失值，及去除某一组中出现频率低于80％质谱离子，然后筛选出每个保留时间下丰度最大的碎片离子的积分信息，为校正质谱响应，对筛选后每个样品的总峰面积进行归一化，将归一化的数据导入到SIMCA-P V11.0软件，经Par标度化后进行PLS-DA分析；

G.多标准评价方法获取差异性内源代谢物。