[发明专利]一种用于快速检测人禽流感病毒的非诊断性双抗体夹心法

说明书

技术领域

本发明具体涉及人禽流感病毒酶联免疫吸附(ELISA)检测方法，属于免疫检测技术领域。

背景技术

自从1997年在香港发现人类也会感染禽流感之后，此病症引起全世界卫生组织的高度关注。其后，该病一直在亚洲区零星爆发，但在2003年12月开始，禽流感在东亚多国-主要在越南、韩国、泰国-严重爆发，并造成越南多名病人丧生。直到2005年中，疫症不但未有平息的迹象，而且还不断扩散。现时远至东欧多个国家亦有案例。

禽流感是由禽流感病毒引起的烈性人畜共患病。波及范围之广，危害程度之深引起了科学家的极大关注，各国投入大量的人力和财力对禽流感进行深入研究，但目前为止还不能完全控制和消除危害，因此对禽流感的检测预防显得非常关键。目前禽流感检测技术主要有分子生物学技术和血清学诊断技术，分子生物学检测方法需要专业理论知识和配套的昂贵实验仪器，不便于基层对禽流感病毒进行快速简便的检测。而ELISA方法具有灵敏度高、可标准化操作和结果易于分析等特点，能够帮助人们有效的检测和防控禽流感疫情，是世界卫生组织推荐的检测禽流感病毒的主要方法之一。

发明内容

针对现有情况存在的问题，本发明的目的在于提供一种灵敏度高、特异性好的用于快速检测禽流感病毒的双抗体夹心法。

为实现上述目的，本发明一种用于快速检测人禽流感病毒的非诊断性双抗体夹心法，该方法具体为：

1)人工改造合成突变的人禽流感病毒HA基因；

2)设计扩增表达人禽流感病毒HA基因引物；

3)禽流感病毒HA基因的PCR扩增；

4)将目的片段与载体pET100/D-TOPO连接，构建重组质粒；

5)转化表达细胞；

6)IPTG诱导重组蛋白的表达；

7)重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体并纯化；

8)重组蛋白免疫兔制备兔血清并纯化；

9)单克隆抗体用于ELISA包被，制备的多克隆抗体作为检测抗体，辣根过氧化物酶标记的兔抗IgG作为二抗；

10)建立双抗体夹心检测禽流感病毒抗原的方法。

进一步，所述步骤1)中人工改造合成突变的人禽流感病毒HA基因序列为：

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gatggagtga agcctctaat tttgagagat tgtagtgtag ctggatggct cctcggaaac

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