[发明专利]一种用于快速检测人禽流感病毒的非诊断性双抗体夹心法

权利要求书

1.一种用于快速检测人禽流感病毒的非诊断性双抗体夹心法，其特征在于，该方法具体为：

1)人工改造合成突变的人禽流感病毒HA基因；

2)设计扩增表达人禽流感病毒HA基因引物；

3)禽流感病毒HA基因的PCR扩增；

4)将目的片段与载体pET100/D-TOPO连接，构建重组质粒；

5)转化表达细胞；

6)IPTG诱导重组蛋白的表达；

7)重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体并纯化；

8)重组蛋白免疫兔制备兔血清并纯化；

9)单克隆抗体用于ELISA包被，制备的多克隆抗体作为检测抗体，辣根过氧化物酶标记的兔抗IgG作为二抗；

10)建立双抗体夹心检测禽流感病毒抗原的方法。

2.如权利要求1所述的用于快速检测禽流感病毒的非诊断性双抗体夹心法，其特征在于，所述步骤1)中人工改造合成突变的人禽流感病毒HA基因序列为：

atggagaaaa tagtgcttct tcttgcaata gtcagtcttg ttaaaagtga tcagatttgc

attggttacc acgcaaacaa ctcgacagtg caggttgaca caataatgga aaagaacgtt

actgtcacac atgcccaaga catactggaa aagacacaca atgggaagct ctgcgatcta

gatggagtga agcctctaat tttgagagat tgtagtgtag ctggatggct cctcggaaac

ccaatgtgtg acgaattcat caatgtgccg gaatggtctt acatagtgga gaaggccagt

ccagccaatg acatctgtta cccaggggat ttcaacgact atgaagaact gaaacaccta

ttgagcagaa taaaccattt tgagaaaatt cagatcatcc ccaaaagttc ttggcccaat

catgaagcct cattaggggt gagctcagca tgtccatacc aggggaagtc ctcctttttc

agaaatgtgg tatggcttat caaaaagaac aatgcatacc caacaataaa gaagagctac

aataatacca accaagaaga tcttttggta ctgtggggga ttcaccaccc taatgatgcg

gccgagcaga taaagctcta tcaaaaccca aacacctata tttccgttgg aacatcaaca

ctaaaccagc gtttggtacc aaaaatagct actagatcca aagtaaacgg gcaaagtgga

agaatggagt tcttctggac aattttaaag ccgaatgatg ctatcaattt cgagagtaat

ggaaatttca ttgctccaga atatgcatac aaaattgtca agaaagggga ctcagcaatt

atgaaaagtg aattggaata tggtaactgc aacaccaagt gtcaaactcc aatgggggcg

ataaactcta gtatgccatt ccacaacata caccctatca ccatcgggga atgccccaaa

tatgtgaaat caaacagatt agtccttgca actggactca gaaatgcccc tcaaagagag

agaagacgta aaaagaga。

3.如权利要求1所述的用于快速检测禽流感病毒的非诊断性双抗体夹心法，其特征在于，所述步骤2)中HA基因引物序列为：

HA-F：5′-cacatggagaaaatagtgcttcttc-3′

HA-R：5′-tctctttttacgtcttctctc-3’。