[发明专利]胞磷胆碱的制备方法

权利要求书

1.一种胞磷胆碱的制备方法，以嘧啶从头合成为基础反应，该方法包括：在有微生物A的培养液存在的情况下，或者还有微生物B的培养液或处理物存在的情况下，将胆碱原料在反应温度20～38℃反应10～72小时，控制pH 5～7.5，累积生成胞磷胆碱；

所述的胆碱原料选自胆碱、氯化胆碱、磷酸胆碱、碘化胆碱或溴化胆碱；

所述微生物A选自属于棒杆菌属(Corynebacterium)、短杆菌属(Brevibacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Rseudomonas)、酿酒酵母属(Saccharomyces cerevisiae)中的一个或2个以上属的菌株。

所述微生物B选自①啤酒发酵的工业啤酒酵母菌体，或者②含有磷酸胆碱转胞苷酰酶的大肠杆菌、谷氨酸棒杆菌之一，或者是③含有磷酸胆碱转胞苷酰酶的大肠杆菌、谷氨酸棒杆菌的转化体、培养液或提取物。

2.如权利要求1所述的胞磷胆碱的制备方法，其特征在于所述微生物A为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)QL28001保藏号CGMCC No.5849，谷氨酸棒状杆菌保藏号ATCC No.13032，洋葱假单胞菌保藏号ATCC No.25416，柠檬节杆菌保藏号ATCC No.11624，酿酒酵母保藏号ATCC No.40075之一。

3.如权利要求1所述的胞磷胆碱的制备方法，其特征在于步骤如下：

(1)将枯草芽孢杆菌QL28001接种于含有0.1-5％葡萄糖、0.5-5％牛肉膏、1-10％蛋白胨、0.5-5％酵母粉、0.5-1％氯化钠成分的培养液中，32℃培养至糖耗尽时，得微生物A的培养物；

按5wt％的接种量将微生物A的培养物接种于培养液中，所述培养液是含有碳源、氮源和微量元素的水溶液，该培养液碳源浓度为8-20wt％、氮源浓度为3-6wt％、微量元素浓度为0.2-5wt％，并添加0.1-3％的磷酸盐，30～35℃培养5～25h；得含有微生物A的培养液，或者将培养液离心收集菌体；

(2)向步骤(1)的含有微生物A的培养液中加入胆碱原料，胆碱原料加量为培养液重量的0.5-3wt％，在反应温度20～38℃，反应10～72小时，控制pH 5～7.5条件下反应累积生成胞磷胆碱；

或者，

将步骤(1)的含有微生物A的培养液按照5-30wt％的接种量接种于含有碳源、氮源、微量元素、胆碱原料和微生物B的培养液中，在反应温度20～38℃，反应10～72小时，控制pH 5～7.5，在此培养液中反应累积生成胞磷胆碱。该培养液中碳源浓度为8-20wt％，氮源浓度为3-6wt％，微量元素浓度为0.2-5wt％，微生物B浓度为5-30wt％，胆碱原料加量为培养液重量的0.5-3wt％，30～35℃培养5～25h。

4.如权利要求3所述的胞磷胆碱的制备方法，其特征在于所述步骤(2)的培养液中还添加有0.005-0.05wt％的表面活性剂；优选的，表面活性剂为吐温-80。

5.如权利要求1所述的胞磷胆碱的制备方法，其特征在于步骤如下：

1)将微生物A接种于含有0.5％葡萄糖、0.5％牛肉膏、1％蛋白胨、0.5％酵母粉、0.5％氯化钠成分的培养液中，32℃培养至糖耗尽时，分离菌体得微生物A的培养物；

2)将步骤1)微生物A的培养物按照5-20wt％的接种量接种于含有碳源、氮源、微量元素的培养液中，在反应温度20～38℃，反应10～30小时分离菌体；所述培养液中碳源浓度为8-20wt％，氮源浓度为3-6wt％，微量元素浓度为0.2-5wt％；

3)将步骤2)菌体按照5-30wt％加入含有碳源、氮源、微量元素、胆碱原料、表面活性剂和微生物B的培养液中，在反应温度20～38℃，反应20～72小时，控制pH 5～7.5，在此培养液中反应生成累积胞磷胆碱。所述培养液中碳源浓度为8-20wt％，氮源浓度为3-6wt％，微量元素浓度为0.2-5wt％，微生物B浓度为5-30wt％，胆碱原料加量为培养液重量的0.5-3wt％；或者，

将步骤2)的菌体按照5-30wt％加入含有碳源、氮源、微量元素、胆碱原料的培养液中，在反应温度20～38℃，反应20～72小时，控制pH 5～7.5，在此培养液中反应生成累积胞磷胆碱；所述培养液中碳源浓度为8-20wt％，氮源浓度为3-6wt％，微量元素浓度为0.2-5wt％，胆碱原料加量为培养液重量的0.5-3wt％。