[发明专利]黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备参数的优选方法、制备工艺及应用

说明书

技术领域

本发明属于一种动物饲用微生态调节剂，具体地说是一种黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备参数的优选方法、制备工艺及应用。

背景技术

从1950年美国食品与药物管理局首次批准抗生素作为饲料添加剂以来，抗生素在提高动物的生产效率发挥了巨大作用。但抗生素在动物产品中的残留和导致病原菌耐药性等问题日益引起人们的重视。世界各国正逐步限制或禁止在饲料中使用抗生素。1999年瑞士禁止使用饲用抗生素；2006年欧盟全面禁止抗生素作为饲料添加剂；2001年9月4日我国正式规定蛋鸡饲料中不得使用任何抗生素。

抗生素作为饲料添加剂的另一缺陷是它不仅杀死动物肠道内的有害菌，也杀死了有益菌，破坏了动物肠道内微生物平衡，从而导致动物发生腹泻等疾病。因此，人们开始将目光转向微生态制剂。微生态制剂是在微生态学理论的指导下，调整生态失调，保持动物肠道微生态平衡，提高宿主健康水平或增进健康状态的生理性活菌制品及其代谢产物以及促进这些生理菌群生长繁殖的生物制品。微生态制剂包括益生菌、益生元和合生元。

益生菌是指含活菌或菌体组分及代谢产物的生物制品，它经口或其它粘膜进入机体，可在粘膜表面处改善微生物区系的屏障功能或刺激特异或非特异性免疫。它作为一种无毒、无残留、无抗药性的抗生素有效替代品而得到广泛应用。目前常用的益生菌主要有乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌和真菌四大类。其中芽孢杆菌因其抗逆性强、耐高温高压、易贮存等优良特性，且具有调节肠道菌群平衡、增强动物免疫力、提高生产性能等诸多功能，被认为是最理想的微生物添加剂。但是随着研究的深入，人们发现益生菌在产品应用方面存在较大困难，如活菌制剂稳定性差、产品种类单一、应用范围有限、效果不稳定等。

益生元是指在胃肠道的上部不能被水解也不能被吸收、能选择性地刺激肠内有益菌（如芽孢杆菌等）生长繁殖并激活其代谢功能、能促进肠内健康优势菌群的构成并提高其数量，并能增强宿主机体健康的物质。天然植物成分低聚糖（如黄芪多糖）、微藻及天然植物等都是具有益生元特性的物质。根据益生菌和益生元的特性，一些科学家也进而考虑把两者结合起来，这一想法最终促成了合生元的诞生。

合生元是把指益生菌与益生元合并使用的制剂，具有同时发挥益生菌与益生元双重作用的特点。丁轲等报道用中草药和益生菌合生元对大肠杆菌和沙门氏菌具有很好的抑制作用。李亚杰等也用黄芪多糖与益生菌制成合生元，显著提高了肉鸡的日增重，增强了肉鸡的免疫功能。合生元既可发挥益生菌的生理性细菌活性，又可选择性增加这种菌的数量使益生作用更持久，是一种很有潜力的微生态调节剂。

合生元在动物体上的作用效果要优于益生菌和益生元，然而，市面上的由合生元制品多是益生菌和益生元的复合添加，在制备工艺中没有考虑优选益生元的浓度、益生菌的培养温度、培养时间以及合生元的活菌数，因而不能确保合生元产品的使用效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备参数的优选方法、制备工艺及应用，通过体外培养试验，科学选取黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备参数，实现制备工艺优化，确保合生元产品的使用效果。

本发明的原理：根据枯草芽孢杆菌的生长曲线，确定枯草芽孢杆菌的培养最佳温度。利用菌液OD值，确定适宜的黄芪多糖添加量。再根据枯草芽孢杆菌生长代时G，确定合生元的最佳培养时间，最终确定黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元的最佳制备工艺。

本发明提供的黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备参数的优选方法如下：

1、生长曲线绘制和培养温度的确定：将活化后的枯草芽孢杆菌ACCC11025菌液以 1%的接种量接种于营养肉汤培养基中，分别于32 ℃、120 r·min^-1和 37 ℃和120 r·min^-1的条件下振荡培养，隔0.5 h取样1次，连续培养12h，于540 nm下测定其吸光度，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标绘制曲线，根据生长曲线确定培养最佳温度；

2、黄芪多糖最适添加量的确定：在营养肉汤培养基里加入不同比例的黄芪多糖，使黄芪多糖的浓度分别为：0 mg·mL^-1、1 mg·mL^-1、1.5 mg·mL^-1、2 mg·mL^-1，将每个浓度的培养基分装入 3 个容器瓶中，每个容器瓶中的液体相等，115 ℃灭菌 15 min 后作为实验用培养基；