[发明专利]黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备参数的优选方法、制备工艺及应用

权利要求书

1.一种黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备参数的优选方法，其特征是：

a、生长曲线及培养温度的确定：将活化后的枯草芽孢杆菌ACCC11025菌液以容量比1%的接种量接种于营养肉汤培养基中，分别于32 ℃、120 r·min^-1和 37 ℃和120 r·min^-1的条件下培养，隔0.5 h取样1次，连续培养12h，于540 nm下测定其吸光度，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标绘制生长曲线，确定培养温度；

b、黄芪多糖最适添加量的确定：以营养肉汤培养基，加入不同比例的黄芪多糖，使黄芪多糖的浓度分别为：0 mg·mL^-1、1 mg·mL^-1、1.5 mg·mL^-1、2 mg·mL^-1，将每个浓度的培养基分装入 3 个容器瓶中，每个容器瓶中的液体相等，115 ℃灭菌15 min 后作为实验用培养基；

将活化后的枯草芽孢杆菌菌液以容量比1%的接种量分别加入上述含不同浓度的黄芪多糖液体培养基中，置 37 ℃、120 r·min^-1培养箱中振荡培养，分别在4h、4.5h、5h、5.5h、6h、6.5h、7 h时采样，于540 nm下测定其吸光度，以确定黄芪多糖最适添加量；

c、黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元最适培养时间的确定：将黄芪多糖的最适添加量确定好后，根据测量的最适添加浓度组的OD值，利用公式计算代时G，从而根据枯草芽孢杆菌在每个时间段的代时以确定他们的最适培养时间；

G =(t2-t1)/3.322(lgx2-lgx1) 

式中：t1、t2分别代表培养时间，x1、x2分别代表不同时间合生元的OD值；

d、黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元菌液活菌数检测：利用平板菌落计数法对黄芪多糖-枯草芽孢杆菌菌液活菌数进行检测。

2.一种如权利要求1所述黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备参数的优选方法的制备工艺如下：

a、以营养肉汤培养基，加入黄芪多糖，使黄芪多糖的含量为1~2 mg·mL^-1；

b、将活化后的枯草芽孢杆菌菌液以容量比 1%的接种量接种于含量为1~2 mg·mL^-1的黄芪多糖液体培养基中，置37℃、120 r·min^-1培养箱中振荡培养，4.5~6h后取出，即得深黄色的黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元产品。

3.根据权利要求2所述的黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备参数的优选方法的制备工艺，其特征是：营养肉汤培养基中的黄芪多糖的最佳含量为1.5 mg·mL^-1；枯草芽孢杆菌接种于黄芪多糖液体培养基中在37 ℃、120 r·min^-1培养箱中振荡培养，最适培养时间为5.5 h。

4.一种如权利要求2所述黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元制备工艺的应用：每天灌喂一次，灌喂量10~16 mL。