[发明专利]一种检测p52Shc/p66Shc基因表达模式的分子诊断试剂盒及其检测方法及应用

权利要求书

1.一种检测p52^Shc/p66^Shc基因表达模式的分子诊断试剂盒，其特征在于：试剂盒由RNA抽提体系、RNA逆转录反应体系和PCR反应体系组成，其中PCR反应体系含有特异扩增p52^Shc基因的引物的序列为：序列1和序列2；含有特异扩增p66^Shc基因的引物的序列为：序列3和序列4。

2.根据权利要求1所述的检测p52^Shc/p66^Shc基因表达模式的分子诊断试剂盒，其特征在于：所述RNA抽提体系具体包括：TRIzol、氯仿、异丙醇、75％乙醇和Nuclease-Free Water。

3.根据权利要求1所述的检测p52^Shc/p66^Shc基因表达模式的分子诊断试剂盒，其特征在于：所述RNA逆转录反应体系具体包括：oligo(dT)₁₈、dNTP Mix、5×Reverse Transcript Reaction Buffer、Nuclease-Free Water和Reverse Transcriptase。

4.根据权利要求1所述的检测p52^Shc/p66^Shc基因表达模式的分子诊断试剂盒，其特征在于：所述PCR反应体系具体包括：Nuclease-Free Water、dNTP Mix、10×PCR Reaction Buffer、DNA聚合酶、引物序列1、引物序列2、引物序列3和引物序列4。

5.一种如权利要求1所述的检测p52^Shc/p66^Shc基因表达模式的分子诊断试剂盒的检测方法，其特征在于：步骤如下：

(1)从临床获得实体肿瘤患者手术后的新鲜肿瘤样本，用RNA抽提体系提取样本的总RNA；

(2)使用RNA逆转录反应体系将该总RNA经逆转录反应转变为cDNA；

(3)以该cDNA为模板，用PCR反应体系通过PCR反应分别特异扩增p52^Shc和p66^Shc基因的目标DNA片段，将PCR产物送到生物技术公司测序；

(4)分析该PCR产物在SNP rs8191981位点的测序峰图，计算p66^Shc单等位基因表达模式的丢失程度，对肿瘤患者病理分型和预后作出判断。