[发明专利]牛奶抗体谱诊断试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种牛奶抗体谱诊断试剂盒，包括显色底物，印记反应槽，鼠抗人IgE-AP标记抗体，其特征在于：该试剂盒还包括分别包被有酪蛋白(1)、大分子蛋白(2)、α-乳白蛋白(3)、β-乳球蛋白(4)和兔抗鼠IgG抗体(5)的硝酸纤维膜检测条(6)，标本稀释液，酶标抗体稀释液和浓缩洗液。

2.根据权利要求1所述牛奶抗体谱诊断试剂盒，其特征在于：硝酸纤维膜检测条上按一定间距形成有包被酪蛋白(1)并标记（T1）、包被大分子蛋白(2)并标记（T2）、包被α-乳白蛋白（3）并标记（T3）、包被β-乳球蛋白（4）并标记（T4）的检测区(T),以及包被兔抗鼠IgG抗体(5)并标记（C）的质控区。

3.根据权利要求1所述牛奶抗体谱诊断试剂盒的制备方法，包括显色底物，印记反应槽，鼠抗人IgE-AP标记抗体，其特征在于：该试剂盒还包括分别包被有酪蛋白、大分子蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白的检测区和包被兔抗鼠IgG抗体的质控区的硝酸纤维膜检测条，稀释待测血清的标本稀释液，与兔抗鼠IgG抗体结合的酶标抗体稀释液和浓缩洗液；

其中，硝酸纤维膜检测条的制备方法是：硝酸纤维素膜在膜处理液中浸泡5-10分钟，经蛋白点样板按一定间距，以1.6-2.4毫克/毫升的浓度分别一次点样形成包被酪蛋白、大分子蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白的检测区和包被兔抗鼠IgG抗体的质控区，室温温育2小时，依次用蒸馏水、膜处理液冲洗后，再用1.8%-2.2%的聚乙烯醇溶液室温封闭1小时，漂洗  弃去封闭液，风干，备用；

其大分子蛋白的制备方法是：

a.鲜牛奶低温离心去脂过滤得脱脂奶，加入等量0.1M pH 7.4 磷酸盐缓冲溶液,用盐酸调pH至4.6；40℃水浴30min，使酪蛋白充分析出，离心取上清的乳清蛋白，超滤器浓缩，使蛋白浓度至5-10mg/ml，备用；

b.另取凝胶粉末溶于足量双蒸水中充分溶胀，溶胀后的凝胶经脱气处理，装入层析柱内，用0.01M pH 7.4 PB充分平衡；

c.取2-3ml乳清蛋白溶液，加在凝胶上面，用0.01M pH 7.4 PB洗脱，最先被洗脱的蛋白峰即为大分子蛋白。

4.根据权利要求3所述牛奶抗体谱诊断试剂盒的制备方法，其特征在于：酶标抗体稀释液是按以下配比的原料制备的：

双蒸水                      80 ml

三羟甲基氨基甲烷          0.606 g

氯化钠                    0.877 g

氯化镁                      0.1ml

氯化锌                      0.1ml

氨基己酸                      1 g

叠氮钠                      0.1 g

牛血清白蛋白                  2 g

加双蒸水定容至1L，用HCl或NaOH调PH，保证其在7.95-8.05范围内，最后用0.22μm的滤膜过滤。

5.根据权利要求3所述牛奶抗体谱诊断试剂盒的制备方法，其特征在于：标本稀释液是按以下配比的原料制备的：

双蒸水                       400 ml

三羟甲基氨基甲烷             3.03 g

氯化钠                        4.38g

防腐剂300                   0.25ml

用HCl或NaOH调pH于7.95-8.05

牛血清白蛋白                    10g

吐温20                      0.25ml

加入双蒸水至500ml，用0.22μm的滤膜过滤。

6.根据权利要求3所述牛奶抗体谱诊断试剂盒的制备方法，其特征在于：浓缩洗液是按以下配比的原料制备的：

双蒸水                      140 ml

三羟甲基氨基甲烷            12.12g

氯化钠                      17.72g

防腐剂300                   10 ml

氯化镁1M                     2 ml

氯化锌0.1M                   2 ml

用HCl或NaOH调PH使其在7.3-7.5，加入4ml的Tween20，用双蒸水定容至200ml，最后用0.22μm的滤膜过滤，临用时用蒸馏水稀释10倍。