[发明专利]具有β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的蛋白质及其编码基因和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的蛋白质及其编码基因和应用。

背景技术

几丁质又名甲壳素、几丁聚糖，是N-乙酰氨基葡萄糖的β-1，4糖苷键多聚物。几丁质广泛存在于低等植物、菌类、藻类，节肢动物虾、蟹及昆虫的外壳和软骨，高等植物的细胞壁等，是自然界中仅次于纤维素的第二大天然生物有机资源，年生物合成量达100亿吨。

微生物对几丁质的有效降解通过几丁质酶(chitinase，EC 3.2.1.14)和几丁二糖酶即β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetylglucosaminidase，Nag，EC 3.2.1.52)等的协同作用得以实现。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的蛋白质及其编码基因和应用。

本发明提供的蛋白质，获自维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)，命名为NAG565蛋白，是如下(a)或(b)或(c)：

(a)序列表中序列1自N末端第23至883位氨基酸残基组成的蛋白质；

(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(c)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶功能的由序列1衍生的蛋白质。

为了使(a)或(b)中的蛋白质便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列

  标签  残基  序列  Poly-Arg  5-6(通常为5个)  RRRRR  Poly-His  2-10(通常为6个)  HHHHHH  FLAG  8  DYKDDDDK  Strep-tag II  8  WSHPQFEK  c-myc  10  EQKLISEEDL

上述(c)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(c)中的蛋白质的编码基因可通过将(a)或(b)的编码基因中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

编码所述蛋白的基因也属于本发明的保护范围。

所述基因可为如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：

1)序列表中序列2自5’末端第第67至2649位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码具有β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码具有β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的蛋白的DNA分子。