[发明专利]用磁性固定化磷脂酶A1精炼毛油的方法

说明书

本发明专利申请是由申请号为201010538226.9，申请日为2010年11月10日，发明名称为“磁性固定化磷脂酶A₁的制备方法及用磁性固定化磷脂酶A₁精炼毛油的方法”的发明专利的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种用固定化磷脂酶A₁精炼毛油的方法。

背景技术

固定化酶在保持其高效专一及温和的酶催化反应特性的同时，又克服了游离酶的不足之处，呈现贮存稳定性高、分离回收容易、可多次重复使用、操作连续可控、工艺简便等优点。固定化酶在化学、生物学及生物工程、医学及生命科学领域广泛应用。使用现有方法制备固定化磷脂酶A₁存在固定化酶分离回收困难，活力回收率低(一般为40％～60％)的问题。

植物油脂中的胶质主要是磷脂混合物，脱胶是植物油精炼中非常重要的工序，脱胶效果好坏将直接影响精炼效率和产品质量；若脱胶不完全，则会加重脱色负担，影响油脂质量和精炼经济效益。植物油磷脂可分为水化磷脂和非水化磷脂，水化磷脂具有亲水性，可通过水化方法脱除，而非水化磷脂具有明显的疏水性，在水化脱胶中较难与水结合，其存在会给油脂精炼带来很多麻烦。

现已提出用游离酶法水解脱除非水化磷脂，但在实际生产中发现游离磷脂酶对反应环境敏感，易变性失活，反应条件不易控制。因此将酶进行固定化，可提高它的稳定性和利用效率。目前尚没有将磁性固定化酶用于精炼毛油的报道。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有方法制备固定化磷脂酶A₁存在固定化酶分离回收复杂，活力回收率低，及目前尚没有将磁性固定化酶用于精炼毛油的问题，而提供一种磁性固定化磷脂酶A₁的制备方法及用磁性固定化磷脂酶A₁精炼毛油的方法。

本发明的磁性固定化磷脂酶A₁的制备方法，按以下步骤进行：一、制备Fe₃O₄纳米粒子；二、制备Fe₃O₄/SiO_x复合粒子；三、制备Fe₃O₄/SiO_x-APTS载体；四、制备磁性Fe₃O₄/SiO_x-g-P(GMA)复合粒子；五、将磁性Fe₃O₄/SiO_x-g-P(GMA)复合粒子加入到0.1mol/L且pH值为7～7.2的磷酸缓冲液中浸泡24～26h，然后进行磁分离，得浸泡后的载体；六、将磷脂酶A₁加入0.1mol/L且pH值为5.5～9.5的磷酸缓冲液中，制成质量浓度为0.2％的磷脂酶A₁磷酸缓冲液，然后将浸泡后的载体加入到12～88mL磷脂酶A₁磷酸缓冲液中，在10～50℃下用磁力搅拌器搅拌2～9h，搅拌速度为10～12r/min，然后进行磁分离，用0.1mol/L且pH值为7～7.2的磷酸缓冲液冲洗2～3次，即得到磁性固定化磷脂酶A₁；其中步骤五中每克磁性Fe₃O₄/SiO_x-g-P(GMA)复合粒子加入到48～50mL磷酸缓冲液中。

利用上述的磁性固定化磷脂酶A₁精炼毛油的方法，按以下步骤进行：一、使用水化脱胶法脱除毛油中的水化磷脂，得到除去水化磷脂的毛油，将除去水化磷脂的毛油进行水浴加热至70～90℃，加入质量浓度为40％～50％的柠檬酸溶液，混匀，柠檬酸溶液的质量为除去水化磷脂的毛油质量的0.1％～2％，在搅拌速度为400～600r/min的条件下反应10～30min；二、然后冷却至30～70℃，加入质量浓度为3％～5％NaOH溶液调节pH值至3～9，再加入磁性固定化磷脂酶A₁，每千克除去水化磷脂的毛油加入0.04～0.16g的磁性固定化磷脂酶A₁，于搅拌速度为40～120r/min下反应1～6h，用磁铁将磁性固定化磷脂酶A₁与除去水化磷脂的毛油分离，即得到脱胶油。

本发明的优点：