[发明专利]一种高通量富集、捕获副溶血性弧菌的方法

权利要求书

1.一种高通量富集、捕获副溶血性弧菌的方法，其特征在于：采用副溶血性弧菌的多克隆抗体，利用EDC/NHS活化法将所述副溶血性弧菌的多克隆抗体偶联在表面包被着羧基的磁珠上，获得制备副溶血性弧菌的免疫磁珠；重悬已偶联多抗的免疫磁珠，将其加入到反应管中，再加入反应液和样品液，在洗脱管中加入洗涤液，采用系统进行免疫富集。

2.根据权利要求1所述的一种高通量富集、捕获副溶血性弧菌的方法，其特征在于：所述免疫磁珠的制备方法为：

磁珠活化：用2-(N-吗啉代)乙磺酸(pH 5)洗涤磁珠1-3次，然后加入50mg/ml的碳二亚胺溶液和50mg/ml的N-羟基琥珀酰亚胺溶液，室温反应20-40分钟，得到活化的磁珠；

磁珠与多抗偶联：将副溶血弧菌多抗加入到活化的磁珠中，室温培养2-4小时；加入含有1％(w/v)牛血清白蛋白的PBS溶液，封闭反应20-40分钟；加入以含0.02％(w/v)叠氮化钠NaN₃、0.1％(w/v)牛血清白蛋白BSA的PBS作为保存液，配成终浓度为15mg/ml的免疫磁珠溶液。

3.根据权利要求1所述的一种高通量富集、捕获副溶血性弧菌的方法，其特征在于：应用系统高通量富集捕获副溶血性弧菌的反应过程如下：

A.取免疫磁珠溶液于PBS洗涤缓冲液中反复洗涤1-3次，再加入100μl PBS重悬免疫磁珠；

B.安装反应体系：将50ml反应液和如步骤A所处理后的免疫磁珠溶液置于样品管，加入待检测样品拍打液，在洗脱管中加入35ml的洗脱液；

C.打开仪器，将反应套装安装在反应支架中，进行免疫富集。

4.根据权利要求3所述的一种高通量富集、捕获副溶血性弧菌的方法，其特征在于：应用系统进行高通量富集捕获副溶血性弧菌的反应条件为：免疫磁珠的用量为不少于0.75mg；反应液为Tris-HCl或PBS；洗脱液为PBS、PBS+0.05％Tween-20或PBS+0.1％Tween-20。

5.根据权利要求4所述的一种高通量富集、捕获副溶血性弧菌的方法，其特征在于：应用系统高通量富集捕获副溶血性弧菌的最优化反应条件，具体为：免疫磁珠的用量为1.5mg；反应液为pH 6.4的Tris-HCl；洗脱液为PBS+0.05％Tween-20。