[发明专利]一种对虾病毒感染模型的建立方法

权利要求书

1.一种对虾病毒感染模型的建立方法，包括：

(1)将人工接种WSSV后发病死亡的凡纳滨对虾去除附肢、头胸甲和肝胰腺并称重，与0.01M PBS按质量体积比1∶10稀释，玻璃匀浆器匀浆，匀浆液于4℃离心20min，上清液依次用滤纸和0.45μm滤膜过滤除菌并分装成病毒保存液，-80℃冻存备用；

(2)体重7～9g、PCR检测阴性的健康凡纳滨对虾在室内池塘暂养1周后，随机分组，每组14只，分别暂养于玻纤桶中；每次RNA干扰实验前将病毒保存液稀释成10^-(n-2)、10^-(n-1)、10^-n、10^-(n+1)、10^-(n+2)共5个浓度的感染液，用胰岛素注射器分别于凡纳滨对虾第四腹节处肌肉注射，每尾50μL，对照组同法注射0.01M PBS；对虾养殖水温控制在27～28℃，每天换水1/2，24h持续充气；每天观察四次，捡出死亡和濒死对虾，记录死亡数，持续观察8d；

(3)根据判定标准，进行RNA干扰实验时，病毒感染液浓度为病毒保存液作10^-n倍稀释，既而确定对虾的病毒感染量，建立病毒感染模型。

2.根据权利要求1所述的一种对虾病毒感染模型的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)中n的值为新收集病毒保存液预感染对虾后，7天内致90％以上对虾死亡的最大稀释度。

3.根据权利要求1所述的一种对虾病毒感染模型的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)中每批对虾建立模型用病毒均来自(1)中同批收集并分装的病毒保存液。

4.根据权利要求1所述的一种对虾病毒感染模型的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)中的观察天数为8天。

5.根据权利要求1所述的一种对虾病毒感染模型的建立方法，其特征在于：所述步骤(3)中的判定标准为7d内感染对虾的累积死亡率大于90％的组的最大病毒保存液的稀释度作为RNA干扰用病毒感染浓度。