[发明专利]纳米吸附富集大体积水生动物生活水体中水病毒的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种纳米吸附富集大体积水生动物生活水体中水病毒的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）将纳米富集材料加入到20L～30L水生动物生活水体中富集水病毒； 

（2）对步骤（1）的水生动物生活水体进行粗过滤，得到沉淀物；

（3）将沉淀物放入病毒释放缓冲液中，混匀后静置，得到上清液；

（4）将上清液与纳米磁珠混匀，静置，使病毒吸附在纳米磁珠上；

（5）加入磁铁，混匀后静置，使纳米磁珠吸在磁铁上；

（6）取出磁铁，将磁铁放入病毒活性保存液中； 

其中，所述纳米富集材料为用于富集水生动物淡水生活水体中水病毒的纳米富集材料Ⅰ，该纳米富集材料Ⅰ是由滑石粉、硅藻土和固体安全酸按照质量比为10:3:1混合制成；或用于富集水生动物海水生活水体中水病毒的纳米富集材料Ⅱ，该纳米富集材料Ⅱ是由滑石粉、硅藻土和固体安全酸按照质量比为10:3:2混合制成；

所述纳米磁珠为粒径10-12nm的Fe₃O₄纳米磁珠； 

所述病毒活性保存液为含2%小牛血清的细胞培养液，并且在细胞培养液中添加了鱼类细胞、100U/ML青霉素、0.1mg/ML链霉素和25U/ML制霉菌素，所述细胞培养液的pH为7.5～8.5。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，富集水病毒的具体方法为将10g～50g纳米富集材料加入到20L～30L水生动物生活水体中，搅拌3min使之混匀，然后静置0.5h～24h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，过滤时采用滤纸进行过滤。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述病毒释放缓冲液为含有3%牛肉膏的0.05mol/L甘氨酸的水溶液，pH值为9.5，所述沉淀物与病毒释放缓冲液的质量体积比为1g:1～5ml。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述纳米磁珠与上清液的质量体积比为1g:1～50ml。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述鱼类细胞为草鱼性腺细胞、鲤鱼上皮瘤细胞、胖头鱼肌肉细胞、鲤鱼白血球细胞、草鱼肾脏细胞、大菱大马哈鱼胚胎细胞、鲶鱼性腺细胞、蓝太阳鱼鳃细胞、虹鳟鱼肝细胞、虹鳟鱼性腺细胞中的一种或几种。

7.一种纳米吸附富集大体积水生动物生活水体中水病毒的试剂盒，其特征在于，该试剂盒是由以下试剂组成：

试剂A：纳米富集材料Ⅰ，所述纳米富集材料Ⅰ是由滑石粉、硅藻土和固体安全酸按照质量比为10:3:1混合制成；

试剂B：纳米富集材料Ⅱ，所述纳米富集材料Ⅱ是由滑石粉、硅藻土和固体安全酸按照质量比为10:3:2混合制成；

试剂C：滤纸；

试剂D：病毒释放缓冲液；

试剂E：纳米磁珠，所述纳米磁珠为粒径10-12nm的纳米磁珠；

试剂F：磁铁；

试剂G：病毒活性保存液，所述病毒活性保存液为含2%小牛血清的细胞培养液，并且在细胞培养液中添加了鱼类细胞、100U/ML青霉素、0.1mg/ML链霉素和25U/ML制霉菌素，所述细胞培养液的pH为7.5～8.5。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述鱼类细胞为草鱼性腺细胞、鲤鱼上皮瘤细胞、胖头鱼肌肉细胞、鲤鱼白血球细胞、草鱼肾脏细胞、大菱大马哈鱼胚胎细胞、鲶鱼性腺细胞、蓝太阳鱼鳃细胞、虹鳟鱼肝细胞、虹鳟鱼性腺细胞中的一种或几种。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述病毒释放缓冲液为含有3%牛肉膏的0.05mol/L甘氨酸的水溶液，pH值为9.5。